| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第13-17页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第13页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第13-17页 |
| 2 巨噬细胞概述 | 第17-22页 |
| 2.1 天然免疫 | 第17-18页 |
| 2.2 巨噬细胞 | 第18页 |
| 2.3 单核-巨噬细胞系统 | 第18-19页 |
| 2.4 巨噬细胞极化 | 第19-21页 |
| 2.5 巨噬细胞极化与疾病的相关性 | 第21-22页 |
| 3 KLF4及其与病毒感染 | 第22-23页 |
| 4 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-36页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1 试验动物 | 第24页 |
| 1.2 试验细胞 | 第24页 |
| 1.3 试验病毒 | 第24页 |
| 1.4 试验主要试剂 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-36页 |
| 2.1 PAMs的分离培养 | 第25页 |
| 2.2 间接免疫荧光鉴定PAMs的纯度 | 第25-26页 |
| 2.3 PAMs体外极化刺激处理 | 第26页 |
| 2.4 半定量PCR测定极化相关因子mRNA表达水 | 第26-28页 |
| 2.5 Western blot检测极化标记分子蛋白表达水平 | 第28-29页 |
| 2.6 iNOS活性的测 | 第29-30页 |
| 2.7 Arg-1活性的测定 | 第30页 |
| 2.8 PRRSV TCID50的测定 | 第30-31页 |
| 2.9 PRRSV感染PAMs极化亚型细胞 | 第31页 |
| 2.10 荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.11 猪KLF4基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.12 PCR产物的纯化回收 | 第33页 |
| 2.13 目的基因KLF4与pMD-18T simple载体重组连接 | 第33页 |
| 2.14 重组连接后质粒的转化 | 第33-34页 |
| 2.15 重组克隆的筛选 | 第34页 |
| 2.16 摇菌 | 第34页 |
| 2.17 提取重组克隆质粒 | 第34-35页 |
| 2.18 pCMV-HA真核表达质粒的构建 | 第35页 |
| 2.19 转染重组质粒PCMV-HA-KLF4在Marc-145细胞中的表达及其对PRRSV复制影P向的初步探索 | 第35页 |
| 2.20 数据统计及分析 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-47页 |
| 1 猪肺泡巨噬细胞(PAMs)纯度的鉴定 | 第36页 |
| 2 猪肺泡巨噬细胞(PAMs)体外极化模型的建立 | 第36-39页 |
| 2.1 半定量PCR鉴定巨噬细胞的极化状态 | 第36-37页 |
| 2.2 iNOS和Arginase-1酶活性的测定 | 第37-38页 |
| 2.3 IL-12和Arg-1蛋白含量的检测 | 第38-39页 |
| 3 PAMs极化的亚型对PPRSV增殖的影 | 第39-40页 |
| 3.1 PRRSV N蛋白间接免疫荧光的观察 | 第39页 |
| 3.2 N蛋白的定量分析 | 第39-40页 |
| 4 PRRSV感染M1型巨噬细胞对其模式识别受体mRNA表达的影响 | 第40-42页 |
| 4.1 感染PRRSV后M1型巨噬细胞模式识别受体mRNA表达 | 第40-41页 |
| 4.2 感染PRRSV后M1型巨噬细胞KLF4表达 | 第41-42页 |
| 5 猪KLF4基因真核表达载体构建 | 第42-46页 |
| 5.1 PCR扩增结果 | 第42页 |
| 5.2 重组质粒pMD-18T-KLF4质粒的筛选及鉴定 | 第42-43页 |
| 5.3 重组质粒pMD-18T-KLF4的测序分析 | 第43-45页 |
| 5.4 重组质粒pCMV-HA-KLF4的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 6 转染重组质粒pCMV-HA-KLF4在Marc-145细胞中的表达及其对PRRSV复制影响的初步探索 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59页 |
