| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略词一览表 | 第14-16页 |
| 第1章 引言 | 第16-28页 |
| 1.1 淋巴增强因子-1(LEF-1)的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.1.1 LEF/TCF家族简介 | 第16-17页 |
| 1.1.2 LEF-1结构特征 | 第17-18页 |
| 1.1.3 LEF-1与WNT信号通路 | 第18-20页 |
| 1.1.4 WNT信号通路与人类疾病及肿瘤 | 第20-21页 |
| 1.1.5 LEF-1与肿瘤的发生发展 | 第21-23页 |
| 1.1.6 LEF-1与上皮细胞—间充质转化(EMT) | 第23-24页 |
| 1.2 胃癌的防治现状 | 第24-28页 |
| 1.2.1 RNA干扰(RNAI)机制 | 第24-25页 |
| 1.2.2 RNA干扰在肿瘤治疗中的应用 | 第25页 |
| 1.2.3 胃癌的防治现状 | 第25-28页 |
| 第2章 本课题的立题依据、技术路线、创新之处 | 第28-30页 |
| 立题依据 | 第28-29页 |
| 技术路线 | 第29页 |
| 本课题的创新之处 | 第29-30页 |
| 第3章 靶向LEF-1的shRNA质粒转染 | 第30-40页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 重组质粒的制备 | 第31-33页 |
| 3.2.2 质粒样品浓度与纯度的测定 | 第33页 |
| 3.2.3 质粒样品的电泳检测(1%琼脂糖凝胶) | 第33-34页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第34-35页 |
| 3.2.5 细胞转染 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-37页 |
| 3.3.1 质粒样品的检测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 细胞转染的效率评估 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-40页 |
| 第4章 LEF-1下调对人胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响 | 第40-48页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第40页 |
| 4.1.1 实验材料(同第3章) | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 细胞培养与质粒小量制备(同第3章) | 第41页 |
| 4.2.2 细胞运动力检测(迁移、侵袭能力) | 第41-42页 |
| 4.2.3 细胞增殖、克隆生成能力检测 | 第42-43页 |
| 4.2.4 统计学分析 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 LEF-1表达下调对细胞运动及迁移能力的影响 | 第43-45页 |
| 4.3.2 LEF-1表达下调对细胞增殖、克隆生成能力的影响 | 第45-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第5章 LEF-1下调对人胃癌细胞SGC-7901骨架系统的影响 | 第48-60页 |
| 5.1 材料、试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 5.1.1 实验材料(同第3章) | 第48页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第48-49页 |
| 5.1.4 试剂的配制 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 细胞培养与质粒小量制备(同第3章) | 第49页 |
| 5.2.2 细胞内F-ACTIN的荧光分布检测 | 第49-50页 |
| 5.2.3 细胞内B-TUBULIN的荧光分布检测 | 第50页 |
| 5.2.4 细胞内LAMINB1的分布检测 | 第50-52页 |
| 5.2.5 细胞骨架整体形态结构检测 | 第52页 |
| 5.3 实验结果 | 第52-57页 |
| 5.3.1 细胞内F-ACTIN的荧光分布检测 | 第52-54页 |
| 5.3.2 细胞内B-TUBULIN的荧光分布检测 | 第54-55页 |
| 5.3.3 细胞内LAMINB1的荧光分布检测 | 第55-56页 |
| 5.3.4 细胞骨架整体形态结构检测 | 第56-57页 |
| 5.4 讨论 | 第57-60页 |
| 第6章 LEF-1下调对人胃癌细胞SGC-7901亚显微结构重塑的影响 | 第60-64页 |
| 6.1 材料、试剂及仪器 | 第60-61页 |
| 6.1.1 实验材料(见第3章) | 第60页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第60页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第60页 |
| 6.1.4 试剂的配制 | 第60-61页 |
| 6.2 实验方法 | 第61页 |
| 6.2.1 细胞培养与质粒小量制备(见第3章) | 第61页 |
| 6.2.2 扫描电子显微镜样品的制备与观察 | 第61页 |
| 6.3 实验结果 | 第61-63页 |
| 6.4 讨论 | 第63-64页 |
| 第7章 LEF-1对EMT相关基因表达调节的研究 | 第64-74页 |
| 7.1 材料、试剂及仪器 | 第64-67页 |
| 7.1.1 实验材料(同第3章) | 第64页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第64-65页 |
| 7.1.3 实验仪器 | 第65页 |
| 7.1.4 试剂的配制 | 第65-67页 |
| 7.2 实验方法 | 第67-70页 |
| 7.2.1 细胞培养与质粒小量制备(同第3章) | 第67页 |
| 7.2.2 WESTERN BLOT实验方法 | 第67-70页 |
| 7.2.3 细胞免疫化学法实验方法 | 第70页 |
| 7.3 实验结果 | 第70-72页 |
| 7.3.1 人胃癌SGC-7901细胞总蛋白定量 | 第70页 |
| 7.3.2 LEF-1表达下调对E-CADHERIN,VIMENTIN,SNAIL蛋白表达的影响 | 第70-72页 |
| 7.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第8章 生物信息学分析基因LEF-1与胃癌及相关基因的关系 | 第74-84页 |
| 8.1 LEF-1在肿瘤临床样本中的变异 | 第74-76页 |
| 8.2 LEF-1在胃癌临床样本中的变化统计 | 第76-78页 |
| 8.3 LEF-1在胃癌临床样本中与相关基因的关系 | 第78-80页 |
| 8.4 LEF-1突变与胃癌患者生存期检测 | 第80-81页 |
| 8.5 LEF-1与相关基因的互作分析 | 第81-82页 |
| 8.6 讨论 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第102页 |
