| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-44页 |
| 1.1 前言 | 第12-13页 |
| 1.2 Wnt/β-Catenin信号通路 | 第13-26页 |
| 1.2.1 Wnt/β-Catenin信号通路研究历史 | 第13-15页 |
| 1.2.2 Wnt蛋白的分泌及胞外运输 | 第15-17页 |
| 1.2.3 Wnt/β-Catenin信号通路受体和拮抗剂/激动剂 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Wnt/β-Catenin信号通路关闭状态 | 第18-20页 |
| 1.2.5 Wnt/β-Catenin信号通路开启状态 | 第20-23页 |
| 1.2.6 β-Catenin的调控及生物学功能 | 第23-25页 |
| 1.2.7 Wnt信号通路与疾病 | 第25-26页 |
| 1.3 Nek2激酶结构与功能 | 第26-28页 |
| 1.4 Hippo信号通路 | 第28-40页 |
| 1.4.1 Hippo信号通路概述 | 第28-30页 |
| 1.4.2 Fat支路 | 第30-31页 |
| 1.4.3 Expanded-Merlin-Kibra复合物 | 第31-32页 |
| 1.4.4 细胞极性决定因子 | 第32-33页 |
| 1.4.5 F-actin对Hippo信号通路的影响 | 第33-34页 |
| 1.4.6 STRIPAK复合物 | 第34-35页 |
| 1.4.7 E3泛素连接酶 | 第35-36页 |
| 1.4.8 转录调控 | 第36页 |
| 1.4.9 果蝇不同组织细胞中的Hippo信号通路 | 第36-38页 |
| 1.4.10 Hippo信号通路与癌症 | 第38-40页 |
| 1.5 p38 MAPK信号通路概述 | 第40-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第44-50页 |
| 2.1.1 果蝇培养条件及品系 | 第44-46页 |
| 2.1.2 抗体 | 第46-47页 |
| 2.1.3 细胞株及培养条件 | 第47页 |
| 2.1.4 部分引物和质粒 | 第47-50页 |
| 2.2 试剂和仪器 | 第50-51页 |
| 2.3 缓冲溶液 | 第51-53页 |
| 2.3.1 免疫荧光染色 | 第51页 |
| 2.3.2 蛋白免疫印迹 | 第51-52页 |
| 2.3.3 免疫共沉淀 | 第52页 |
| 2.3.4 蛋白去磷酸化(CIP实验) | 第52页 |
| 2.3.5 GST蛋白纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.6 体外磷酸化 | 第53页 |
| 2.3.7 大肠杆菌培养基(1L) | 第53页 |
| 2.3.8 果蝇培养基(1L) | 第53页 |
| 2.3.9 Single fly PCR buffer | 第53页 |
| 2.4 试验方法 | 第53-64页 |
| 2.4.1 GST蛋白纯化 | 第53-54页 |
| 2.4.2 免疫共沉淀 | 第54页 |
| 2.4.3 体外磷酸化 | 第54页 |
| 2.4.4 蛋白去磷酸化实验 | 第54-55页 |
| 2.4.5 蛋白免疫印迹 | 第55页 |
| 2.4.6 果蝇幼虫成虫盘免疫荧光染色 | 第55-56页 |
| 2.4.7 果蝇卵巢滤泡细胞免疫荧光染色 | 第56页 |
| 2.4.8 MCF-10A细胞免疫荧光染色 | 第56页 |
| 2.4.9 F-actin染色 | 第56-57页 |
| 2.4.10 细胞冻存与复苏 | 第57页 |
| 2.4.11 细胞转染 | 第57页 |
| 2.4.12 RNA抽提 | 第57-58页 |
| 2.4.13 反转录 | 第58页 |
| 2.4.14 荧光定量PCR | 第58页 |
| 2.4.15 双链RNA(dsRNA)制备 | 第58-59页 |
| 2.4.16 果蝇细胞内RNA干扰 | 第59页 |
| 2.4.17 Luciferase Assay | 第59页 |
| 2.4.18 分子生物学常规方法 | 第59-60页 |
| 2.4.19 Single fly PCR | 第60页 |
| 2.4.20 Gal4-UAS系统 | 第60-61页 |
| 2.4.21 FLP-FRT技术 | 第61-62页 |
| 2.4.22 MARCM技术 | 第62-63页 |
| 2.4.23 平衡染色体技术 | 第63-64页 |
| 第三章 Nek2激酶调控Wnt/β-Catenin信号通路的机理 | 第64-80页 |
| 3.1 过表达Nek2激活Wnt/β-Catenin信号通路 | 第64-66页 |
| 3.2 Nek2依赖核内转录因子复合物激活Wnt/β-Catenin信号通路 | 第66-67页 |
| 3.3 Nek2位于Dsh上游 | 第67-68页 |
| 3.4 Nek2对Dsh的多重磷酸化 | 第68-70页 |
| 3.5 Nek2磷酸化Dsh N端上调Wnt/β-Catenin信号通路 | 第70-71页 |
| 3.6 Nek2磷酸化Dsh C端促进其降解 | 第71-72页 |
| 3.7 Nek2磷酸化Dsh的综合作用 | 第72-74页 |
| 3.8 体内敏感型背景下敲低Nek2抑制Wnt/β-Catenin信号通路 | 第74-75页 |
| 3.9 CKIε是Nek2的功能冗余基因 | 第75-77页 |
| 3.10 讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 Lic/p38MAPK信号通号对Hippo信号通路的调控 | 第80-102页 |
| 4.1 Lic过表达上调Hippo信号通路靶基因 | 第80-82页 |
| 4.2 Lic过表达激活Yki | 第82-83页 |
| 4.3 lic缺失在翅膀成虫盘上不影响Hippo信号通路靶基因的表达 | 第83-84页 |
| 4.4 lic缺失在卵巢滤泡细胞中激活Hippo信号通路 | 第84-86页 |
| 4.5 Lic位于Wts和Yki的上游 | 第86-87页 |
| 4.6 Lic对Hippo信号通路的调控与凋亡和JNK信号通路无关 | 第87-89页 |
| 4.7 Lic抑制Hippo信号通路依赖于p38b | 第89-91页 |
| 4.8 Mekk1抑制Hippo信号通路部分依赖于p38b | 第91-92页 |
| 4.9 p38 MAPK信号通路通过促进F-actin聚集抑制Hippo信号通路 | 第92-94页 |
| 4.10 果蝇中Lic促进F-actin的聚集不依赖于Hsp27和MK2 | 第94-95页 |
| 4.11 Ras、Rac1和RhoGEF2激活F-actin的聚集和Hippo信号通路靶基因不依赖于p38 MAPK信号通路 | 第95-97页 |
| 4.12 Lic调控Hippo信号通路在哺乳动物细胞中保守 | 第97-98页 |
| 4.13 讨论 | 第98-102页 |
| 第五章 总结 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其它研究成果 | 第127页 |
