| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 三种梨病毒的危害特点 | 第13-14页 |
| 1.2 三种梨病毒的分子特性 | 第14-15页 |
| 1.3 果树病毒检测技术研究进展 | 第15-23页 |
| 1.3.1 核酸分子杂交技术 | 第16-17页 |
| 1.3.2 双链RNA(dsRNA)技术 | 第17页 |
| 1.3.3 基因芯片技术 | 第17-18页 |
| 1.3.4 实时荧光定量PCR技术 | 第18-20页 |
| 1.3.5 LAMP技术 | 第20-23页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 三种梨病毒实时荧光定量RT-PCR检测技术 | 第24-46页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第24页 |
| 2.1.2 试剂及仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 研究方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 Dnase Ⅰ消化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 RT-PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.5 基因克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.6 引物用量及反应温度的优化 | 第30-31页 |
| 2.2.7 阳性质粒标准品的构建 | 第31页 |
| 2.2.8 标准曲线的绘制 | 第31页 |
| 2.2.9 qRT-PCR引物特异性检测 | 第31页 |
| 2.2.10 qRT-PCR引物灵敏度验证 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 2.3.1 三种梨病毒qRT-PCR检测引物的筛选 | 第32-34页 |
| 2.3.2 引物用量对PCR扩增反应的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.3 温度梯度对PCR扩增反应的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.4 溶解曲线的分析 | 第36页 |
| 2.3.5 标准曲线的绘制 | 第36页 |
| 2.3.6 重复性 | 第36-40页 |
| 2.3.7 qRT-PCR检测ASGV、ASPV和ACLSV效果评价 | 第40-43页 |
| 2.3.8 qRT-PCR检测梨三种病毒的效果 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 ACLSV和ASPV两种病毒的RT-LAMP技术 | 第46-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第46页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第46页 |
| 3.2 研究方法 | 第46-51页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第46-48页 |
| 3.2.2 总RNA提取 | 第48页 |
| 3.2.3 RT-PCR扩增 | 第48页 |
| 3.2.4 RT-LAMP反应体系的建立及优化 | 第48-50页 |
| 3.2.5 LAMP扩增产物检测 | 第50页 |
| 3.2.6 RT-LAMP特异性检测 | 第50页 |
| 3.2.7 RT-LAMP检测引物灵敏度验证 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-61页 |
| 3.3.1 ACLSV和LAMP检测引物的筛选 | 第51-52页 |
| 3.3.2 RT-LAMP检测ACLSV和ASPV反应体系的优化 | 第52-56页 |
| 3.3.3 RT-LAMP检测ACLSV和ASPV效果评价 | 第56-61页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 附录A Real-time RT-PCR与单一RT-PCR检测梨样品三种病毒 | 第75-77页 |
| 附录B RT-LAMP与单一RT-PCR检测梨样品三种病毒结果 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
