| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-34页 |
| 1.1 肺癌概述 | 第18-20页 |
| 1.1.1 肺癌的组织病理学分类 | 第18页 |
| 1.1.2 肺癌的流行病学研究 | 第18-19页 |
| 1.1.3 肺癌的病因学研究 | 第19-20页 |
| 1.2 肺癌与DNA甲基化 | 第20-26页 |
| 1.2.1 DNA甲基化的概念 | 第20-21页 |
| 1.2.2 DNA异常甲基化与肿瘤的关系 | 第21-22页 |
| 1.2.3 肺癌相关基因的异常甲基化 | 第22-25页 |
| 1.2.3.1 p16基因 | 第22-23页 |
| 1.2.3.2 CDH1基因 | 第23页 |
| 1.2.3.3 DLEC1基因 | 第23页 |
| 1.2.3.4 DAPK基因 | 第23-24页 |
| 1.2.3.5 RUNX3基因 | 第24页 |
| 1.2.3.6 MGMT基因 | 第24页 |
| 1.2.3.7 APC基因 | 第24-25页 |
| 1.2.3.8 WIF1基因 | 第25页 |
| 1.2.4 DNA甲基化的研究方法 | 第25-26页 |
| 1.3 肺癌的早期诊断 | 第26-29页 |
| 1.3.1 肺癌早期诊断的意义及现状 | 第26-27页 |
| 1.3.2 常见的肺瘤肿瘤标志物 | 第27-28页 |
| 1.3.3 DNA甲基化可作为肺癌的分子标志物 | 第28-29页 |
| 1.4 肺癌的早期诊断与“液体活检” | 第29-31页 |
| 1.4.1 “液体活检”的概念及意义 | 第30页 |
| 1.4.2 血浆游离DNA在肺癌早期诊断中的意义 | 第30-31页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第31-34页 |
| 第二章 候选基因在组织样本中的甲基化检测及筛选 | 第34-60页 |
| 2.1 研究对象 | 第34页 |
| 2.2 主要试剂与材料 | 第34-35页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第35页 |
| 2.3 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.4 相关引物 | 第36-38页 |
| 2.5 实验方法 | 第38-48页 |
| 2.5.1 组织样本及临床资料的收集 | 第38-39页 |
| 2.5.2 组织样本的处理 | 第39-40页 |
| 2.5.3 组织DNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.5.4 外周血白细胞DNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.5.5 组织DNA浓度的测定 | 第42页 |
| 2.5.6 组织DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.5.7 组织DNA的亚硫酸氢盐修饰 | 第43页 |
| 2.5.8 组织DNA中八个候选基因的巢式甲基化特异性PCR | 第43-47页 |
| 2.5.9 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第47页 |
| 2.5.10 判断标准 | 第47页 |
| 2.5.11 数据分析与统计处理 | 第47-48页 |
| 2.6 实验结果 | 第48-58页 |
| 2.6.1 组织DNA的提取结果 | 第48页 |
| 2.6.2 组织DNA中候选基因的甲基化检测结果 | 第48-53页 |
| 2.6.2.1 组织中p16基因的甲基化状态 | 第48-49页 |
| 2.6.2.2 组织中DLEC1基因的甲基化状态 | 第49页 |
| 2.6.2.3 组织中CDH1基因的甲基化状态 | 第49-50页 |
| 2.6.2.4 组织中DAPK基因的甲基化状态 | 第50页 |
| 2.6.2.5 组织中RUNX3基因的甲基化状态 | 第50-51页 |
| 2.6.2.6 组织中APC基因的甲基化状态 | 第51页 |
| 2.6.2.7 组织中WIF1基因的甲基化状态 | 第51-52页 |
| 2.6.2.8 组织中MGMT基因的甲基化状态 | 第52页 |
| 2.6.2.9 组织中八个候选基因的甲基化状态小结 | 第52-53页 |
| 2.6.3 组织中多个基因的甲基化联合检测情况 | 第53-54页 |
| 2.6.4 组织中八个候选基因的异常甲基化与其临床特征的关系 | 第54-57页 |
| 2.6.5 肺癌患者在七个基因中发生甲基化的比例与临床特征间的关系 | 第57-58页 |
| 2.7 小结 | 第58-60页 |
| 第三章 血浆中目的基因的甲基化检测及其对早期诊断的意义 | 第60-84页 |
| 3.1 研究对象 | 第60页 |
| 3.2 主要试剂与材料 | 第60-61页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第60页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第60-61页 |
| 3.3 主要仪器 | 第61页 |
| 3.4 相关引物 | 第61-62页 |
| 3.5 实验方法 | 第62-69页 |
| 3.5.1 外周血样本及临床资料的收集 | 第62页 |
| 3.5.2 血浆样本的分离及保存 | 第62-63页 |
| 3.5.3 血浆cfDNA的提取 | 第63-64页 |
| 3.5.4 血浆cfDNA浓度的测定 | 第64页 |
| 3.5.5 血浆cfDNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第64页 |
| 3.5.6 血浆cfDNA的亚硫酸氢盐修饰 | 第64-65页 |
| 3.5.7 血浆cfDNA中五个目的基因的巢式甲基化特异性PCR | 第65-66页 |
| 3.5.8 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第66页 |
| 3.5.9 判断标准 | 第66页 |
| 3.5.10 PCR结果的验证 | 第66-68页 |
| 3.5.10.1 PCR产物的选取 | 第66页 |
| 3.5.10.2 PCR产物的纯化 | 第66-67页 |
| 3.5.10.3 PCR产物的连接 | 第67页 |
| 3.5.10.4 PCR产物的转化 | 第67页 |
| 3.5.10.5 阳性克隆子的筛选 | 第67-68页 |
| 3.5.10.6 测序 | 第68页 |
| 3.5.10.7 验证 | 第68页 |
| 3.5.11 数据分析与统计处理 | 第68-69页 |
| 3.6 实验结果 | 第69-82页 |
| 3.6.1 血浆中目的基因的甲基化检测结果 | 第69-76页 |
| 3.6.1.1 血浆中p16基因的甲基化状态 | 第69-70页 |
| 3.6.1.2 血浆中DLEC1基因的甲基化状态 | 第70页 |
| 3.6.1.3 血浆中CDH1基因的甲基化状态 | 第70-71页 |
| 3.6.1.4 血浆中DAPK基因的甲基化状态 | 第71-72页 |
| 3.6.1.5 血浆中RUNX3基因的甲基化状态 | 第72页 |
| 3.6.1.6 血浆中五个基因PCR产物的验证结果 | 第72-75页 |
| 3.6.1.7 血浆中五个目的基因甲基化检测的敏感度及特异度 | 第75-76页 |
| 3.6.2 血浆中五个目的基因的甲基化联合检测情况 | 第76-77页 |
| 3.6.3 血浆中五个目的基因的异常甲基化与其临床特征的关系 | 第77-79页 |
| 3.6.4 肺癌患者在五个基因中发生甲基化的比例与临床特征间的关系 | 第79-81页 |
| 3.6.5 肺癌患者血浆与组织中基因异常甲基化情况的相关性分析 | 第81-82页 |
| 3.7 小结 | 第82-84页 |
| 第四章 讨论 | 第84-90页 |
| 4.1 云南地区肺癌患者血浆及组织中基因异常甲基化检测情况 | 第84-85页 |
| 4.2 血浆cfDNA中进行甲基化检测对肺癌早期诊断的意义 | 第85-86页 |
| 4.3 多基因甲基化联合检测在肺癌早期诊断中的意义 | 第86页 |
| 4.4 基因异常甲基化与肺癌患者临床特征间的关系 | 第86-87页 |
| 4.5 肺癌患者多个基因中发生甲基化的比例与其临床特征间的关系 | 第87-90页 |
| 第五章 总结与展望 | 第90-92页 |
| 5.1 全文总结 | 第90-91页 |
| 5.2 展望 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第100页 |
