| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 植物体细胞胚发生 | 第13-14页 |
| 2 影响植物体细胞胚发生与发育的因素 | 第14-15页 |
| 2.1 内在因素 | 第14页 |
| 2.2 外在因素 | 第14-15页 |
| 3 细胞信号转导与植物体细胞发生 | 第15-19页 |
| 3.1 植物细胞信号转导概述 | 第15-16页 |
| 3.2 植物体细胞胚发生中的CA~(2+)信号系统 | 第16-17页 |
| 3.3 活性氧与体细胞胚发生 | 第17-18页 |
| 3.4 NO的信号转导途径 | 第18-19页 |
| 4 体细胞胚发生过程中的酶代谢动态及内源激素变化 | 第19-22页 |
| 4.1 体细胞胚发生过程中的酶代谢动态 | 第19-20页 |
| 4.2 体细胞胚发生过程中内源激素的变化 | 第20-22页 |
| 5 体细胞胚发生相关类受体蛋白激酶基因（SERK）研究进展 | 第22-24页 |
| 5.1 SERK基因的发现及基本结构 | 第22-23页 |
| 5.2 SERK基因的表达与体细胞胚发生 | 第23-24页 |
| 5.3 SERK的信号转导 | 第24页 |
| 6 植物遗传转化技术研究进展 | 第24-27页 |
| 6.1 植物遗传转化概述 | 第24-25页 |
| 6.2 植物遗传转化途径与方法 | 第25页 |
| 6.3 农杆菌介导植物遗传转化的应用 | 第25-26页 |
| 6.4 影响农杆菌介导植物遗传转化的因素 | 第26-27页 |
| 6.4.1 农杆菌菌株类型对转化的影响 | 第26页 |
| 6.4.2 外植体类型对转化的影响 | 第26-27页 |
| 6.4.3 转化条件对转化的影响 | 第27页 |
| 6.4.4 选择性抗生素对转化的影响 | 第27页 |
| 7 牡丹体细胞胚诱导研究现状 | 第27-28页 |
| 8 本研究主要内容与意义 | 第28-30页 |
| 8.1 研究内容 | 第28-29页 |
| 8.2 研究意义 | 第29-30页 |
| 第二章 细胞信号转导因子与牡丹胚性愈伤组织诱导 | 第30-55页 |
| 引言 | 第30-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-36页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.2 试剂 | 第31页 |
| 1.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 1.3.1 愈伤组织诱导与增殖培养 | 第31-32页 |
| 1.3.2 细胞信号转导因子（H_2O_2、CA~(2+)、NO）对牡丹愈伤组织影响的实验设计 | 第32页 |
| 1.3.3 抗氧化酶活性测定 | 第32-33页 |
| 1.3.4 内源激素含量的测定 | 第33-35页 |
| 1.3.5 显微切片观察 | 第35-36页 |
| 1.4 数据处理与分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-51页 |
| 2.1 CACL_2处理对牡丹愈伤组织生长的影响 | 第36-41页 |
| 2.1.1 牡丹愈伤组织生长的形态学观察 | 第36-37页 |
| 2.1.2 牡丹愈伤组织生长中相关酶活性变化 | 第37-41页 |
| 2.2 H_2O_2处理对牡丹愈伤组织生长的影响 | 第41-45页 |
| 2.2.1 牡丹愈伤组织生长的形态学观察 | 第41-42页 |
| 2.2.2 牡丹愈伤组织生长中相关酶活性变化 | 第42-45页 |
| 2.3 SNP处理对牡丹愈伤组织生长的影响 | 第45-50页 |
| 2.3.1 牡丹愈伤组织生长的形态学观察 | 第45-46页 |
| 2.3.2 牡丹愈伤组织生长中相关酶活性变化 | 第46-47页 |
| 2.3.3 牡丹愈伤组织生长中内源激素变化 | 第47-50页 |
| 2.4 牡丹胚性愈伤组织诱导中的显微组织切片观察 | 第50-51页 |
| 3 结论与讨论 | 第51-55页 |
| 3.1 牡丹胚性愈伤组织诱导中的形态和显微切片观察 | 第51-52页 |
| 3.2 牡丹胚性愈伤组织诱导中的抗氧化酶活性变化 | 第52-53页 |
| 3.3 牡丹胚性愈伤组织诱导中的内源激素变化 | 第53-55页 |
| 第三章 牡丹体细胞胚胎发生相关基因PSSERK的克隆与表达分析 | 第55-89页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 材料与方法 | 第55-65页 |
| 1.1 供试材料 | 第55-56页 |
| 1.2 试验试剂与仪器设备 | 第56页 |
| 1.3 总RNA的提取及质量检测 | 第56-57页 |
| 1.3.1 总RNA提取 | 第56-57页 |
| 1.3.2 总RNA质量检测 | 第57页 |
| 1.4 牡丹PSSERK基因保守区的克隆 | 第57-60页 |
| 1.4.1 CDNA第一链合成 | 第57-58页 |
| 1.4.2 保守区的扩增 | 第58页 |
| 1.4.3 PCR产物的检测与回收纯化 | 第58-59页 |
| 1.4.4 PCR片段的连接与转化 | 第59页 |
| 1.4.5 菌液的PCR验证 | 第59-60页 |
| 1.4.6 序列测定 | 第60页 |
| 1.5 牡丹PSSERK基因 3′ RACE的克隆 | 第60-61页 |
| 1.5.1 3′RACE引物设计 | 第60页 |
| 1.5.2 3′RACE CDNA第一链的合成 | 第60-61页 |
| 1.5.3 3′ RACE扩增 | 第61页 |
| 1.6 牡丹PSSERK基因 5′RACE的克隆 | 第61-63页 |
| 1.6.1 5′RACE引物设计 | 第61页 |
| 1.6.2 5′RACE-READY CDNA合成 | 第61-62页 |
| 1.6.3 5′末端的PCR扩增 | 第62-63页 |
| 1.7 牡丹PSSERK基因全长ORF序列的PCR扩增 | 第63-64页 |
| 1.7.1 CDNA第一链合成 | 第63页 |
| 1.7.2 ORF序列的扩增 | 第63-64页 |
| 1.8 牡丹PSSERK基因编码蛋白质的生物信息学分析 | 第64页 |
| 1.9 牡丹PSSERK基因荧光定量表达分析 | 第64-65页 |
| 1.9.1 牡丹RNA提取 | 第64页 |
| 1.9.2 表达分析引物设计 | 第64页 |
| 1.9.3 CDNA第一链的合成 | 第64-65页 |
| 1.9.4 实时荧光定量PCR | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-87页 |
| 2.1 总RNA提取结果与检测 | 第65-66页 |
| 2.1.1 浓度与纯度检测 | 第65页 |
| 2.1.2 琼脂糖凝胶电泳检测结果 | 第65-66页 |
| 2.2 牡丹PSSERK基因CDNA全长克隆 | 第66-69页 |
| 2.2.1 牡丹PSSERK基因保守区扩增结果 | 第66-67页 |
| 2.2.2 牡丹PSSERK基因 3′ RACE扩增结果 | 第67-68页 |
| 2.2.3 牡丹PSSERK基因 5′ RACE扩增结果 | 第68-69页 |
| 2.3 牡丹PSSERK基因CDNA全长克隆 | 第69-72页 |
| 2.4 牡丹PSSERK基因编码蛋白的同源性比较及系统进化分析 | 第72-74页 |
| 2.5 牡丹PSSERK蛋白的生物信息学分析 | 第74-85页 |
| 2.5.1 PSSERK蛋白序列理化参数 | 第74-75页 |
| 2.5.2 PSSERK蛋白亲疏水性分析 | 第75-76页 |
| 2.5.3 PSSERK蛋白跨膜区分析 | 第76-77页 |
| 2.5.4 PSSERK蛋白信号肽预测 | 第77-78页 |
| 2.5.5 PSSERK蛋白螺旋结构的预测与分析 | 第78-79页 |
| 2.5.6 PSSERK蛋白亚细胞定位 | 第79页 |
| 2.5.7 PSSERK蛋白规则的二级结构预测与分析 | 第79-80页 |
| 2.5.8 PSSERK蛋白的三维结构预测与分析 | 第80-81页 |
| 2.5.9 PSSERK蛋白家族及保守结构域的预测与分析 | 第81页 |
| 2.5.10 PSSERK蛋白磷酸化位点预测与分析 | 第81-83页 |
| 2.5.11 PSSERK蛋白功能基序预测与分析 | 第83-85页 |
| 2.6 牡丹PSSERK基因荧光定量PCR分析 | 第85-87页 |
| 2.6.1 总RNA提取 | 第85-86页 |
| 2.6.2 标准曲线结果 | 第86-87页 |
| 2.6.3 牡丹不同组织PSSERK基因相对定量表达分析 | 第87页 |
| 3 结论与讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 牡丹愈伤组织遗传转化体系的初步建立 | 第89-111页 |
| 引言 | 第89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-94页 |
| 1.1 试验材料 | 第89-90页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第89页 |
| 1.1.2 菌株与质粒 | 第89-90页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第90页 |
| 1.2 试验方法 | 第90-94页 |
| 1.2.1 筛选剂HYG的选择及敏感性试验 | 第90-91页 |
| 1.2.2 抑菌剂（CB、CEF）的选择及敏感性试验 | 第91页 |
| 1.2.3 侵染方式的筛选 | 第91页 |
| 1.2.4 愈伤组织的预培养 | 第91页 |
| 1.2.5 农杆菌侵染愈伤组织 | 第91-92页 |
| 1.2.6 愈伤组织与农杆菌共培养 | 第92页 |
| 1.2.7 GUS基因组织化学染色 | 第92页 |
| 1.2.8 愈伤组织与农杆菌共培养后的抑菌培养 | 第92-93页 |
| 1.2.9 转化愈伤组织筛选培养和检测 | 第93页 |
| 1.2.10 试验观察统计 | 第93-94页 |
| 2 试验结果与分析 | 第94-108页 |
| 2.1 质粒DNA纯度及浓度的检测 | 第94页 |
| 2.2 转化农杆菌的检测 | 第94-96页 |
| 2.2.1 转化农杆菌抗性筛选 | 第94-95页 |
| 2.2.2 GUS目的片段的PCR扩增及测序 | 第95-96页 |
| 2.3 牡丹愈伤组织遗传转化体系的初步构建 | 第96-108页 |
| 2.3.1 选择性抗生素HYG的选择及敏感性试验 | 第96-97页 |
| 2.3.2 抑菌性抗生素（CB、CEF）的选择及敏感性和抑菌试验 | 第97-98页 |
| 2.3.3 侵染方式的筛选 | 第98-99页 |
| 2.3.4 GUS基因组织化学染色温度 | 第99页 |
| 2.3.5 预培养时间对转化的影响 | 第99-100页 |
| 2.3.6 菌种的选择 | 第100-101页 |
| 2.3.7 侵染浓度及时间的筛选 | 第101-102页 |
| 2.3.8 共培养时间及温度的筛选 | 第102-104页 |
| 2.3.9 抑菌培养方式及CEF浓度的筛选 | 第104-107页 |
| 2.3.10 转化愈伤组织的筛选培养 | 第107页 |
| 2.3.11 转化愈伤组织GUS组织化学染色检测 | 第107-108页 |
| 3 结论与讨论 | 第108-111页 |
| 3.1 菌株类型对遗传转化的影响 | 第108页 |
| 3.2 抑菌性抗生素在遗传转化中的应用 | 第108页 |
| 3.3 遗传转化体系中相关影响因子对转化的影响 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 附图 | 第125-132页 |
| 攻读期间科研成果 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| ABSTRACT | 第134-135页 |
