| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-33页 |
| 1.1 古菌概述 | 第11-13页 |
| 1.2 硫化叶菌 | 第13-16页 |
| 1.2.1 硫化叶菌概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 冰岛硫化叶菌遗传体系 | 第14-16页 |
| 1.2.3 硫化叶菌与病毒 | 第16页 |
| 1.3 微生物的病毒防御系统 | 第16-18页 |
| 1.3.1 微生物的病毒防御系统的分类 | 第16-17页 |
| 1.3.2 细菌和古菌中的HEPN结构域 | 第17-18页 |
| 1.4 原核生物CRISPR-Cas获得性免疫系统 | 第18-29页 |
| 1.4.1 CRISPR-Cas系统的发现历程 | 第18-20页 |
| 1.4.2 CRISPR-Cas系统分类及依据 | 第20-22页 |
| 1.4.3 CRISPR-Cas系统工作机制概述 | 第22-28页 |
| 1.4.4 CRISPR-Cas系统的应用 | 第28-29页 |
| 1.5 Type III-B型CRISPR-Cas获得性免疫系统 | 第29-31页 |
| 1.5.1 Cmr复合体的发现及作用机理 | 第29-30页 |
| 1.5.2 Cmr复合体切割RNA | 第30页 |
| 1.5.3 Cmr复合体切割DNA | 第30-31页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-47页 |
| 2.1 材料 | 第33-37页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基组成 | 第33-36页 |
| 2.1.3 分子试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 2.2 方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 质粒抽提及总DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第38-39页 |
| 2.2.3 大肠DH5α 感受态的制备及转化 | 第39-40页 |
| 2.2.4 冰岛硫化叶菌感受态的制备及转化 | 第40-41页 |
| 2.2.5 缺失菌株的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.6 LasS比酶活测定 | 第42-43页 |
| 2.2.7 检测冰岛硫化叶菌体内的Cmr-α 系统RNA干涉的强度 | 第43-44页 |
| 2.2.8 检测体内的DNA干涉活性 | 第44-46页 |
| 2.2.9 检测不同长度的mini-CRISPR质粒的RNA干涉活性 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-64页 |
| 3.1 冰岛硫化叶菌Cmr-α 系统在CRISPR系统中的分类 | 第47-48页 |
| 3.2 验证在?cmr-β E233S背景下构建的基因缺失株 | 第48-49页 |
| 3.3 缺失对Cmr-α 系统的影响 | 第49-54页 |
| 3.3.1 缺失对Cmr-α 系统RNA干涉的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.2 缺失csx1基因对Cmr-α 系统DNA干涉的影响 | 第51-54页 |
| 3.4 crRNA的突变对冰岛硫化叶菌体内的Cmr-α 系统RNA干涉的影响 | 第54-61页 |
| 3.4.1 不同的crRNA的spacer长度对冰岛硫化叶菌体内的Cmr-α 系统RNA干涉的影响 | 第54-59页 |
| 3.4.2 不同crRNA位点突变对冰岛硫化叶菌体内的Cmr-α 系统RNA干涉的影响 | 第59-61页 |
| 3.5 冰岛硫化叶菌Cmr-α 系统之外的蛋白对其DNA targeting活性的影响 | 第61-64页 |
| 3.5.1 检测?98Kb E233S菌株中Cmr-α 系统的DNA targeting活性 | 第61-63页 |
| 3.5.2 在?98Kb E233S中互补Cmr-α 系统之外的蛋白的DNA targeting活性 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 4.1 Cmr-α 系统的RNA干涉活性 | 第64-65页 |
| 4.2 Cmr-α 系统的DNA干涉活性 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 研究成果 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
