| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第9-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-40页 |
| 1.1 杜氏藻概况 | 第16-17页 |
| 1.2 杜氏藻耐盐机制的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 杜氏藻耐盐渗透调节机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 杜氏藻耐盐相关基因或蛋白的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 杜氏藻耐盐相关转录因子或者元件研究 | 第19-21页 |
| 1.2.4 小分子RNAs（MicroRNAs）在盐胁迫中的作用 | 第21页 |
| 1.3 类胡萝卜素概述 | 第21-23页 |
| 1.3.1 番茄红素（Lycopene） | 第22页 |
| 1.3.2 β-胡萝卜素（β-Carotene） | 第22-23页 |
| 1.3.3 玉米黄素（Zeaxanthin） | 第23页 |
| 1.4 类胡萝卜素的合成与降解途径 | 第23-32页 |
| 1.4.1 类胡萝卜素的合成途径 | 第23-28页 |
| 1.4.2 类胡萝卜素的降解途径 | 第28-32页 |
| 1.4.3 巴氏藻类胡萝卜素合成与降解途径的研究概况 | 第32页 |
| 1.5 类胡萝卜素代谢调控的研究 | 第32-33页 |
| 1.5.1 杜氏藻胁迫响应下对类胡萝卜素合成的影响 | 第32页 |
| 1.5.2 类胡萝卜素合成积累机制的研究 | 第32-33页 |
| 1.6 生化阻遏与类胡萝卜素积累 | 第33-34页 |
| 1.7 类胡萝卜素代谢工程（Metabolic Engineering） | 第34-38页 |
| 1.7.1 大肠杆菌的类胡萝卜素代谢工程 | 第35页 |
| 1.7.2 酵母类胡萝卜素代谢工程 | 第35-36页 |
| 1.7.3 植物类胡萝卜素代谢工程 | 第36页 |
| 1.7.4 藻类类胡萝卜素代谢工程 | 第36-38页 |
| 1.8 本论文的研究内容和意义 | 第38-40页 |
| 第二章 巴氏藻类胡萝卜素合成与降解相关基因的分子克隆 | 第40-80页 |
| 2.1 前言 | 第40-41页 |
| 2.2 实验材料与试剂仪器 | 第41-44页 |
| 2.2.1 藻种 | 第41页 |
| 2.2.2 菌种与载体 | 第41页 |
| 2.2.3 培养基 | 第41-42页 |
| 2.2.4 主要试剂和试剂盒 | 第42-44页 |
| 2.2.5 主要设备仪器 | 第44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-59页 |
| 2.3.1 巴氏藻的培养 | 第44页 |
| 2.3.2 巴氏藻总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 2.3.3 反转录PCR和 3’-RACE PCR | 第45-48页 |
| 2.3.4 利用转录组测序方法分离巴氏藻类胡萝卜素合成与降解相关基因 | 第48页 |
| 2.3.5 cDNA末端快速扩增技术（RACE） | 第48-51页 |
| 2.3.6 巴氏藻基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| 2.3.7 基因组步移法 | 第52-55页 |
| 2.3.8 目的DNA的回收、克隆、转化与测序 | 第55-58页 |
| 2.3.9 生物信息学分析和生物软件 | 第58-59页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第59-78页 |
| 2.4.1 巴氏藻总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 2.4.2 巴氏藻总基因组的提取 | 第60页 |
| 2.4.3 利用转录组测序方法分离巴氏藻中的目的基因序列 | 第60-62页 |
| 2.4.4 利用RACE方法分离巴氏藻中的DbZISO、DbLcyE和DbBCH基因序列 | 第62-63页 |
| 2.4.5 利用转录组测序信息分离巴氏藻CYP家族基因 | 第63-66页 |
| 2.4.6 巴氏藻GGPS、CRTISO、BCH和CYP97s的基因组结构分析 | 第66-69页 |
| 2.4.7 巴氏藻GGPS蛋白序列的生物信息学分析 | 第69-73页 |
| 2.4.8 巴氏藻ZISO和CRTISO蛋白序列的生物信息学分析 | 第73-74页 |
| 2.4.9 巴氏藻BCH蛋白序列的生物信息学分析 | 第74-75页 |
| 2.4.10 巴氏藻CYP97s蛋白序列的特征 | 第75-77页 |
| 2.4.11 巴氏藻CCD蛋白序列的特征 | 第77-78页 |
| 2.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 第三章 巴氏藻牻牛儿牻牛儿焦磷酸合酶（GGPS）的功能活性鉴定 | 第80-97页 |
| 3.1 前言 | 第80页 |
| 3.2 实验材料与试剂仪器 | 第80-82页 |
| 3.2.1 质粒、菌株和藻种 | 第80页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第80-82页 |
| 3.2.3 主要设备 | 第82页 |
| 3.3 实验方法 | 第82-91页 |
| 3.3.1 质粒的提取 | 第82-83页 |
| 3.3.2 In-Fusion基因克隆技术 | 第83-84页 |
| 3.3.3 纯化PCR产物或酶切产物 | 第84页 |
| 3.3.4 原核表达载体pET32a-DbGGPS构建 | 第84-86页 |
| 3.3.5 重组GGPS蛋白的表达 | 第86-87页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第87-88页 |
| 3.3.7 DbGGPS在大肠杆菌中的功能互补实验 | 第88-90页 |
| 3.3.8 大肠杆菌工程菌中类胡萝卜素的提取 | 第90页 |
| 3.3.9 HPLC检测类胡萝卜素成分和含量 | 第90-91页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第91-95页 |
| 3.4.1 大肠杆菌干重与OD600的关系 | 第91-92页 |
| 3.4.2 pET32a-DbGGPS质粒构建 | 第92页 |
| 3.4.3 重组GGPS蛋白的诱导表达 | 第92页 |
| 3.4.4 DbGGPS的功能活性鉴定 | 第92-95页 |
| 3.5 本章小结 | 第95-97页 |
| 第四章 巴氏藻 β-胡萝卜素羟化酶（BCH）的功能活性鉴定 | 第97-105页 |
| 4.1 前言 | 第97页 |
| 4.2 实验材料与试剂仪器 | 第97-98页 |
| 4.2.1 质粒、菌株和藻种 | 第97-98页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第98页 |
| 4.2.3 主要设备 | 第98页 |
| 4.3 实验方法 | 第98-99页 |
| 4.3.1 DbBCH的原核表达载体构建 | 第98页 |
| 4.3.2 大肠杆菌转化株中BCH功能互补实验 | 第98-99页 |
| 4.3.3 DbBCH的原核表达 | 第99页 |
| 4.3.4 大肠杆菌转化子类胡萝卜素的提取和检测 | 第99页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第99-104页 |
| 4.4.1 pET32a-Db BCH的构建 | 第99-100页 |
| 4.4.2 双质粒转化株的构建 | 第100-101页 |
| 4.4.3 DbBCH蛋白的异源表达 | 第101页 |
| 4.4.4 DbBCH的功能活性鉴定 | 第101-104页 |
| 4.5 本章小结 | 第104-105页 |
| 第五章 巴氏藻类胡萝卜素裂解双加氧酶（CCD）的功能活性鉴定 | 第105-116页 |
| 5.1 前言 | 第105页 |
| 5.2 实验材料与试剂仪器 | 第105-106页 |
| 5.2.1 质粒、菌株和藻种 | 第105-106页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第106页 |
| 5.2.3 主要设备 | 第106页 |
| 5.3 实验方法 | 第106-108页 |
| 5.3.1 DbCCDs原核表达载体构建 | 第106-107页 |
| 5.3.2 大肠杆菌转化株中CCD功能互补实验 | 第107-108页 |
| 5.3.3 DbCCDs的原核表达 | 第108页 |
| 5.3.4 大肠杆菌转化子类胡萝卜素的提取和检测 | 第108页 |
| 5.3.5 大肠杆菌中挥发性类胡萝卜素降解产物的检测 | 第108页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第108-114页 |
| 5.4.1 pET32a-DbCCDs的构建 | 第108-109页 |
| 5.4.2 双质粒转化株的构建和DbCCDs蛋白的异源表达 | 第109页 |
| 5.4.3 DbCCDs的功能活性鉴定 | 第109-113页 |
| 5.4.4 巴氏藻中CCD酶的代谢通路 | 第113-114页 |
| 5.5 本章小结 | 第114-116页 |
| 第六章 番茄红素环化酶的阻遏与巴氏藻中番茄红素的积累 | 第116-128页 |
| 6.1 前言 | 第116页 |
| 6.2 实验材料与试剂仪器 | 第116-117页 |
| 6.2.1 藻种 | 第116页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第116-117页 |
| 6.2.3 主要设备 | 第117页 |
| 6.3 实验方法 | 第117-121页 |
| 6.3.1 巴氏藻的培养及三乙胺的加入方式 | 第117页 |
| 6.3.2 藻细胞计数与生物量计算 | 第117页 |
| 6.3.3 巴氏藻中类胡萝卜素的提取 | 第117-118页 |
| 6.3.4 巴氏藻中类胡萝卜素的检测及总类胡萝卜素的测定 | 第118页 |
| 6.3.5 不同三乙胺浓度对巴氏藻的生长及番茄红素合成的影响 | 第118页 |
| 6.3.6 荧光定量PCR（qRT-PCR）分析 | 第118-121页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第121-126页 |
| 6.4.1 藻细胞计数标准曲线的确立 | 第121页 |
| 6.4.2 藻细胞干重标准曲线的确立 | 第121页 |
| 6.4.3 不同盐度下巴氏藻的生长和 β-胡萝卜素的积累情况 | 第121-122页 |
| 6.4.4 不同三乙胺浓度对巴氏藻的生长影响 | 第122-123页 |
| 6.4.5 不同三乙胺浓度对巴氏藻的类胡萝卜素合成的影响 | 第123-125页 |
| 6.4.6 三乙胺的添加对巴氏藻中类胡萝卜素途径中的基因表达的影响 | 第125-126页 |
| 6.5 本章小结 | 第126-128页 |
| 第七章 巴氏藻盐胁迫下类胡萝卜素积累机制的研究 | 第128-139页 |
| 7.1 前言 | 第128-129页 |
| 7.2 实验材料与试剂仪器 | 第129页 |
| 7.2.1 藻种 | 第129页 |
| 7.2.2 主要试剂 | 第129页 |
| 7.2.3 主要设备 | 第129页 |
| 7.3 实验方法 | 第129-132页 |
| 7.3.1 巴氏藻盐胁迫处理 | 第129页 |
| 7.3.2 利用转录组测序信息分离可能响应盐胁迫的基因 | 第129-130页 |
| 7.3.3 荧光定量PCR检测盐胁迫下基因表达水平的变化 | 第130页 |
| 7.3.4 启动子调控元件分析 | 第130页 |
| 7.3.5 序列分析工具 | 第130-132页 |
| 7.4 实验结果与讨论 | 第132-137页 |
| 7.4.1 分离可能响应盐胁迫的基因 | 第132页 |
| 7.4.2 巴氏藻WRKY转录因子的特征 | 第132-133页 |
| 7.4.3 巴氏藻类胡萝卜素相关基因启动子耐盐元件分析 | 第133-135页 |
| 7.4.4 荧光定量PCR分析盐胁迫下基因表达水平的变化 | 第135-137页 |
| 7.5 本章小结 | 第137-139页 |
| 结论与展望 | 第139-144页 |
| 结论 | 第139-141页 |
| 创新之处 | 第141-142页 |
| 展望 | 第142-144页 |
| 参考文献 | 第144-166页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第166-168页 |
| 致谢 | 第168-170页 |
| 附件 | 第170页 |
