| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| §1-1 群体感应 | 第11-13页 |
| 1-1-1 革兰氏阴性细菌中的群体感应系统 | 第11-12页 |
| 1-1-2 革兰氏阳性细菌中的群体感应系统 | 第12-13页 |
| 1-1-3 细菌种间群体感应系统 | 第13页 |
| §1-2 群体感应的抑制 | 第13-16页 |
| 1-2-1 对AHLs 合成途径的抑制 | 第14页 |
| 1-2-2 破坏群体感应系统的受体蛋白 | 第14页 |
| 1-2-3 对AHLs 与受体蛋白结合的抑制 | 第14页 |
| 1-2-4 对AHLs 的降解 | 第14-16页 |
| §1-3 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第16-21页 |
| 1-3-1 毕赤酵母酵母表达菌株 | 第16-17页 |
| 1-3-2 毕赤酵母酵母表达载体 | 第17页 |
| 1-3-3 启动子 | 第17-18页 |
| 1-3-4 信号肽 | 第18页 |
| 1-3-5 影响毕赤酵母高效表达的因素 | 第18-20页 |
| 1-3-6 发展前景 | 第20-21页 |
| §1-4 课题研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 aiiA 基因在毕赤酵母中的表达及活性检测 | 第22-47页 |
| §2-1 材料 | 第22-28页 |
| 2-1-1 供试菌株及载体 | 第22页 |
| 2-1-2 引物 | 第22-23页 |
| 2-1-3 主要试剂 | 第23页 |
| 2-1-4 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2-1-5 培养基 | 第24-25页 |
| 2-1-6 溶液配制 | 第25-28页 |
| §2-2 方法 | 第28-37页 |
| 2-2-1 大肠杆菌 DH5α 感受态细胞制备 | 第29页 |
| 2-2-2 大肠杆菌的热激转化 | 第29页 |
| 2-2-3 CTAB 法提取质粒DNA | 第29-30页 |
| 2-2-4 从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段 | 第30页 |
| 2-2-5 毕赤酵母表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2-2-6 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2-2-7 毕赤酵母电击转化 | 第32-33页 |
| 2-2-8 重组毕赤酵母表型鉴定 | 第33页 |
| 2-2-9 重组毕赤酵母的抗性筛选 | 第33页 |
| 2-2-10 重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第33页 |
| 2-2-11 重组毕赤酵母RNA 提取 | 第33-34页 |
| 2-2-12 反转录PCR (RT-PCR) | 第34-35页 |
| 2-2-13 重组酵母菌G5115(pPIC3.5k-aiiA)的诱导表达 | 第35页 |
| 2-2-14 SDS-PAGE 分析 | 第35-36页 |
| 2-2-15 银染法 | 第36页 |
| 2-2-16 抗体纯化 | 第36页 |
| 2-2-17 Western Blot 检测 | 第36-37页 |
| 2-2-18 Dot Blot 检测 | 第37页 |
| 2-2-19 毕赤酵母表达AiiA 蛋白活性的检测 | 第37页 |
| §2-3 结果 | 第37-45页 |
| 2-3-1 AiiA 蛋白的胞内表达 | 第37-41页 |
| 2-3-1-1 aiiA 基因真核表达载体pPIC3.5K -aiiA 的构建 | 第37-39页 |
| 2-3-1-2 阳性重组子的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| 2-3-1-3 RT-PCR 检测分析 | 第40页 |
| 2-3-1-4 表达产物的SDS-PAGE 及Western Blot 分析 | 第40-41页 |
| 2-3-1-5 表达产物的活性检测 | 第41页 |
| 2-3-2 AiiA 蛋白的分泌表达 | 第41-45页 |
| 2-3-2-1 aiiA 基因真核表达载体pPIC9K-aiiA 的构建 | 第41-43页 |
| 2-3-2-2 毕赤酵母的电转化 | 第43页 |
| 2-3-2-3 重组酵母菌的PCR 鉴定 | 第43页 |
| 2-3-2-4 重组酵母菌的RT-PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| 2-3-2-5 AiiA 蛋白的诱导表达及活性检测 | 第44-45页 |
| §2-4 讨论 | 第45-46页 |
| §2-5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 aiiA 基因在大肠杆菌中的表达和活性检测 | 第47-53页 |
| §3-1 材料 | 第47-48页 |
| 3-1-1 菌株 | 第47页 |
| 3-1-2 载体 | 第47页 |
| 3-1-3 主要试剂 | 第47页 |
| 3-1-4 培养基 | 第47页 |
| 3-1-5 溶液配制 | 第47-48页 |
| 3-1-6 仪器设备 | 第48页 |
| §3-2 方法 | 第48-49页 |
| 3-2-1 CTAB 法提取质粒DNA | 第48页 |
| 3-2-2 大肠杆菌DH5 感受态的制备和转化 | 第48页 |
| 3-2-3 从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段 | 第48页 |
| 3-2-4 蓝白斑筛选 | 第48页 |
| 3-2-5 重组表达质粒的构建 | 第48-49页 |
| 3-2-6 基因工程菌BL21(pET28a-aiiA)诱导表达 | 第49页 |
| 3-2-7 SDS-PAGE 分析 | 第49页 |
| 3-2-8 Western Blot 检测 | 第49页 |
| §3-3 结果 | 第49-52页 |
| 3-3-1 克隆载体的构建和酶切鉴定 | 第49-51页 |
| 3-3-2 aiiA 基因在大肠杆菌BL21 的表达 | 第51页 |
| 3-3-3 AiiA 蛋白的活性检测 | 第51-52页 |
| §3-4 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第60页 |
