| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 艰难梭菌感染现状 | 第11-13页 |
| 1.1.1 艰难梭菌感染机制 | 第11-12页 |
| 1.1.2 CDI的实验室诊断 | 第12页 |
| 1.1.3 CDI的治疗 | 第12-13页 |
| 1.2 艰难梭菌毒素及其致病基因的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 艰难梭菌毒素分类 | 第13页 |
| 1.2.2 毒素表达的基因调控 | 第13-14页 |
| 1.3 艰难梭菌tcdC基因研究进展 | 第14-18页 |
| 1.3.1 艰难梭菌tcdC基因性质和基因多态性 | 第14-16页 |
| 1.3.2 艰难梭菌tcdC基因对毒素合成的负调节作用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 关于tcdC基因功能的争议 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 艰难梭菌tcdC基因的克隆表达 | 第19-42页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及配方 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 搭桥PCR法合成目的基因 | 第22-23页 |
| 2.2.2 抗原区段的选择 | 第23页 |
| 2.2.3 质粒抽提 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的基因片段 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR产物胶回收纯化 | 第25页 |
| 2.2.6 PCR产物及载体的双酶切 | 第25-26页 |
| 2.2.7 基因片段与载体连接 | 第26页 |
| 2.2.8 连接产物转化 | 第26页 |
| 2.2.9 挑菌鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.10 表达产物的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.11 菌种保存 | 第27页 |
| 2.2.12 阳性菌株的大样发酵 | 第27页 |
| 2.2.13 包涵体提取 | 第27-28页 |
| 2.2.14 蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.15 Western blot蛋白印记实验 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-41页 |
| 2.3.1 CD tcdC基因序列的优化及合成 | 第29-33页 |
| 2.3.2 CD TcdC蛋白抗原表位分析 | 第33页 |
| 2.3.3 CD TcdC蛋白的S（×2）、L片段的原核表达 | 第33-39页 |
| 2.3.4 CD TcdC/S（×2）、TcdC/L重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.5 抗原鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4 结果讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 多克隆抗体的制备 | 第42-54页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第42-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂及配方 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 免疫动物制备多克隆抗体 | 第44页 |
| 3.2.2 多克隆抗体血清效价测定 | 第44页 |
| 3.2.3 多克隆抗体纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 Western Blot蛋白印记实验 | 第45-46页 |
| 3.2.5 CD生长曲线测定 | 第46页 |
| 3.2.6 灰度分析 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-52页 |
| 3.3.1 多克隆抗体效价测定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 多克隆抗体纯化实验结果 | 第47-48页 |
| 3.3.3 抗体特异性检测 | 第48-50页 |
| 3.3.4 艰难梭菌中TcdC蛋白的表达情况 | 第50-52页 |
| 3.4 结果讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 结语 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第61页 |
