致谢 | 第4-9页 |
缩略词表 | 第9-10页 |
摘要 | 第10-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-21页 |
1 植原体研究进展 | 第11-15页 |
1.1 植原体的生理特征及传播方式 | 第11页 |
1.2 植原体检测技术的研究现状 | 第11-14页 |
1.2.1 电子显微镜技术 | 第11-12页 |
1.2.2 组织化学方法 | 第12页 |
1.2.3 血清学检测 | 第12-13页 |
1.2.4 分子生物学检测 | 第13-14页 |
1.3 植原体的分类 | 第14页 |
1.4 植原体基因组研究现状 | 第14-15页 |
2 枣疯病研究现状 | 第15-16页 |
2.1 枣疯病病原及感病症状 | 第15页 |
2.2 枣疯病感病机制的研究 | 第15-16页 |
3 AP2/ERF家族转录因子研究进展 | 第16-21页 |
3.1 植物转录因子的概述 | 第16-17页 |
3.2 AP2/ERF家族转录因子 | 第17-21页 |
3.2.1 AP2/ERF转录因子的结构和分类 | 第17页 |
3.2.2 AP2/ERF转录因子激活和抑制基因表达 | 第17-18页 |
3.2.3 AP2/ERF转录因子参与植物生长发育过程 | 第18页 |
3.2.4 AP2/ERF转录因子调控植物生物和非生物胁迫 | 第18-21页 |
3.2.4.1 调控植物非生物胁迫 | 第19页 |
3.2.4.2 调控植物生物胁迫 | 第19-21页 |
第二章 枣疯病植原体基因组DNA的分离 | 第21-28页 |
1 前言 | 第21页 |
2 材料和方法 | 第21-23页 |
2.1 植物材料 | 第21页 |
2.2 生化试剂 | 第21页 |
2.3 枣疯病植原体染色体DNA的提取 | 第21-22页 |
2.4 脉冲场电泳 | 第22页 |
2.5 胶回收 | 第22页 |
2.6 PCR检测目的DNA | 第22-23页 |
2.7 荧光定量PCR分析 | 第23页 |
3 结果与分析 | 第23-26页 |
3.1 枣疯病植原体的提取及脉冲电泳纯化 | 第23-24页 |
3.2 PCR检测 | 第24-25页 |
3.3 植原体DNA纯化效果检测 | 第25-26页 |
4 结论与讨论 | 第26-28页 |
第三章 枣AP2/ERF家族转录因子的转录组分析 | 第28-50页 |
1 前言 | 第28页 |
2 材料与方法 | 第28-34页 |
2.1 试验材料 | 第28页 |
2.2 试验方法 | 第28-30页 |
2.2.1 嫁接方法 | 第28-29页 |
2.2.2 取样方法 | 第29页 |
2.2.3 改良CTAB法提取DNA | 第29页 |
2.2.4 PCR鉴定 | 第29页 |
2.2.5 DAPI荧光显微术检测 | 第29-30页 |
2.3 枣转录组测序 | 第30-31页 |
2.3.1 植原体侵染不同时期界定 | 第30-31页 |
2.3.2 提取枣叶片RNA | 第31页 |
2.3.3 转录组测序 | 第31页 |
2.4 枣AP2/ERF转录因子的转录组分析 | 第31-32页 |
2.4.1 枣AP2/ERF转录因子家族成员鉴定 | 第31页 |
2.4.2 枣AP2/ERF转录因子差异表达分析 | 第31-32页 |
2.5 实时荧光定量PCR分析 | 第32-33页 |
2.5.1 c DNA第一条链的合成 | 第32-33页 |
2.5.2 荧光定量PCR | 第33页 |
2.6 水杨酸和茉莉酸甲酯胁迫处理 | 第33-34页 |
2.6.1 材料和试剂 | 第33页 |
2.6.2 试验方法 | 第33-34页 |
2.6.3 RNA提取 | 第34页 |
2.6.4 cDNA第一条链合成 | 第34页 |
2.6.5 荧光定量PCR | 第34页 |
3 结果与分析 | 第34-46页 |
3.1 枣AP2/ERF转录因子家族的鉴定和命名 | 第34-37页 |
3.2 枣AP2/ERF转录因子的染色体定位 | 第37-38页 |
3.3 枣AP2/ERF转录因子进化树构建及其分类 | 第38-39页 |
3.4 枣AP2/ERF转录因子的保守结构域和基序分析 | 第39-42页 |
3.5 AP2/ERF转录因子基因在植原体侵染过程中的差异表达分析 | 第42-43页 |
3.6 荧光定量PCR分析 | 第43-44页 |
3.7 水杨酸和茉莉酸甲酯胁迫分析 | 第44-46页 |
4 讨论 | 第46-50页 |
第四章 ZjERF04、ZjERF11和ZjERF18基因的烟草遗传转化和瞬时表达 | 第50-60页 |
1 前言 | 第50页 |
2 材料与方法 | 第50-55页 |
2.1 试验材料 | 第50-51页 |
2.1.1 植物材料 | 第50-51页 |
2.1.2 试验所用试剂 | 第51页 |
2.1.3 试验用仪器 | 第51页 |
2.1.4 试验用培养基及配方 | 第51页 |
2.2 试验方法 | 第51-55页 |
2.2.1 播种 | 第51页 |
2.2.2 枣叶片RNA的提取 | 第51页 |
2.2.3 c DNA第一链的合成 | 第51页 |
2.2.4 ZjERF04、ZjERF11和ZjERF18基因的克隆 | 第51页 |
2.2.5 PCR扩增产物的检测及回收 | 第51-52页 |
2.2.6 回收DNA与克隆载体连接转化 | 第52页 |
2.2.7 重组克隆的验证及测序 | 第52-53页 |
2.2.7.1 阳性克隆验证 | 第52页 |
2.2.7.2 基因序列测定及表达载体构建 | 第52-53页 |
2.2.8 农杆菌介导ZjERF04、ZjERF11、ZjERF18基因转化 | 第53页 |
2.2.8.1 GV3101感受态细胞的制备 | 第53页 |
2.2.8.2 重组质粒转化GV3101感受态细胞 | 第53页 |
2.2.8.3 农杆菌介导烟草遗传转化 | 第53页 |
2.2.9 农杆菌介导烟草叶片瞬时表达 | 第53-54页 |
2.2.9.1 制备菌体清洗液 | 第53-54页 |
2.2.9.2 注射液准备 | 第54页 |
2.2.10 过氧化氢胁迫处理 | 第54页 |
2.2.11 SOD、CAT酶活测定 | 第54-55页 |
2.2.11.1 考马斯亮蓝法测样品蛋白浓度 | 第54-55页 |
2.2.11.2 过氧化氢酶(CAT)活力测定 | 第55页 |
2.2.11.3 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定 | 第55页 |
3 结果分析 | 第55-58页 |
3.1 基因克隆 | 第55-56页 |
3.2 表达载体及转化农杆菌鉴定 | 第56页 |
3.3 烟草遗传转化 | 第56-57页 |
3.4 PCR检测 | 第57-58页 |
3.5 CAT,SOD酶活测定 | 第58页 |
4 讨论 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-69页 |
ABSTRACT | 第69-70页 |