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枣疯病植原体基因组DNA分离和枣ERFs表达特性及功能预测

致谢第4-9页
缩略词表第9-10页
摘要第10-11页
第一章 文献综述第11-21页
    1 植原体研究进展第11-15页
        1.1 植原体的生理特征及传播方式第11页
        1.2 植原体检测技术的研究现状第11-14页
            1.2.1 电子显微镜技术第11-12页
            1.2.2 组织化学方法第12页
            1.2.3 血清学检测第12-13页
            1.2.4 分子生物学检测第13-14页
        1.3 植原体的分类第14页
        1.4 植原体基因组研究现状第14-15页
    2 枣疯病研究现状第15-16页
        2.1 枣疯病病原及感病症状第15页
        2.2 枣疯病感病机制的研究第15-16页
    3 AP2/ERF家族转录因子研究进展第16-21页
        3.1 植物转录因子的概述第16-17页
        3.2 AP2/ERF家族转录因子第17-21页
            3.2.1 AP2/ERF转录因子的结构和分类第17页
            3.2.2 AP2/ERF转录因子激活和抑制基因表达第17-18页
            3.2.3 AP2/ERF转录因子参与植物生长发育过程第18页
            3.2.4 AP2/ERF转录因子调控植物生物和非生物胁迫第18-21页
                3.2.4.1 调控植物非生物胁迫第19页
                3.2.4.2 调控植物生物胁迫第19-21页
第二章 枣疯病植原体基因组DNA的分离第21-28页
    1 前言第21页
    2 材料和方法第21-23页
        2.1 植物材料第21页
        2.2 生化试剂第21页
        2.3 枣疯病植原体染色体DNA的提取第21-22页
        2.4 脉冲场电泳第22页
        2.5 胶回收第22页
        2.6 PCR检测目的DNA第22-23页
        2.7 荧光定量PCR分析第23页
    3 结果与分析第23-26页
        3.1 枣疯病植原体的提取及脉冲电泳纯化第23-24页
        3.2 PCR检测第24-25页
        3.3 植原体DNA纯化效果检测第25-26页
    4 结论与讨论第26-28页
第三章 枣AP2/ERF家族转录因子的转录组分析第28-50页
    1 前言第28页
    2 材料与方法第28-34页
        2.1 试验材料第28页
        2.2 试验方法第28-30页
            2.2.1 嫁接方法第28-29页
            2.2.2 取样方法第29页
            2.2.3 改良CTAB法提取DNA第29页
            2.2.4 PCR鉴定第29页
            2.2.5 DAPI荧光显微术检测第29-30页
        2.3 枣转录组测序第30-31页
            2.3.1 植原体侵染不同时期界定第30-31页
            2.3.2 提取枣叶片RNA第31页
            2.3.3 转录组测序第31页
        2.4 枣AP2/ERF转录因子的转录组分析第31-32页
            2.4.1 枣AP2/ERF转录因子家族成员鉴定第31页
            2.4.2 枣AP2/ERF转录因子差异表达分析第31-32页
        2.5 实时荧光定量PCR分析第32-33页
            2.5.1 c DNA第一条链的合成第32-33页
            2.5.2 荧光定量PCR第33页
        2.6 水杨酸和茉莉酸甲酯胁迫处理第33-34页
            2.6.1 材料和试剂第33页
            2.6.2 试验方法第33-34页
            2.6.3 RNA提取第34页
            2.6.4 cDNA第一条链合成第34页
            2.6.5 荧光定量PCR第34页
    3 结果与分析第34-46页
        3.1 枣AP2/ERF转录因子家族的鉴定和命名第34-37页
        3.2 枣AP2/ERF转录因子的染色体定位第37-38页
        3.3 枣AP2/ERF转录因子进化树构建及其分类第38-39页
        3.4 枣AP2/ERF转录因子的保守结构域和基序分析第39-42页
        3.5 AP2/ERF转录因子基因在植原体侵染过程中的差异表达分析第42-43页
        3.6 荧光定量PCR分析第43-44页
        3.7 水杨酸和茉莉酸甲酯胁迫分析第44-46页
    4 讨论第46-50页
第四章 ZjERF04、ZjERF11和ZjERF18基因的烟草遗传转化和瞬时表达第50-60页
    1 前言第50页
    2 材料与方法第50-55页
        2.1 试验材料第50-51页
            2.1.1 植物材料第50-51页
            2.1.2 试验所用试剂第51页
            2.1.3 试验用仪器第51页
            2.1.4 试验用培养基及配方第51页
        2.2 试验方法第51-55页
            2.2.1 播种第51页
            2.2.2 枣叶片RNA的提取第51页
            2.2.3 c DNA第一链的合成第51页
            2.2.4 ZjERF04、ZjERF11和ZjERF18基因的克隆第51页
            2.2.5 PCR扩增产物的检测及回收第51-52页
            2.2.6 回收DNA与克隆载体连接转化第52页
            2.2.7 重组克隆的验证及测序第52-53页
                2.2.7.1 阳性克隆验证第52页
                2.2.7.2 基因序列测定及表达载体构建第52-53页
            2.2.8 农杆菌介导ZjERF04、ZjERF11、ZjERF18基因转化第53页
                2.2.8.1 GV3101感受态细胞的制备第53页
                2.2.8.2 重组质粒转化GV3101感受态细胞第53页
                2.2.8.3 农杆菌介导烟草遗传转化第53页
            2.2.9 农杆菌介导烟草叶片瞬时表达第53-54页
                2.2.9.1 制备菌体清洗液第53-54页
                2.2.9.2 注射液准备第54页
            2.2.10 过氧化氢胁迫处理第54页
            2.2.11 SOD、CAT酶活测定第54-55页
                2.2.11.1 考马斯亮蓝法测样品蛋白浓度第54-55页
                2.2.11.2 过氧化氢酶(CAT)活力测定第55页
                2.2.11.3 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定第55页
    3 结果分析第55-58页
        3.1 基因克隆第55-56页
        3.2 表达载体及转化农杆菌鉴定第56页
        3.3 烟草遗传转化第56-57页
        3.4 PCR检测第57-58页
        3.5 CAT,SOD酶活测定第58页
    4 讨论第58-60页
参考文献第60-69页
ABSTRACT第69-70页

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