| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第13-33页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 根肿病的生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.2.1 根肿病菌的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 根肿病菌的生活史 | 第14页 |
| 1.2.3 根肿病的症状 | 第14-15页 |
| 1.3 根肿病的检测方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 诱饵检测法 | 第15页 |
| 1.3.2 镜检和血清学检测 | 第15-16页 |
| 1.3.3 PCR 检测 | 第16-17页 |
| 1.4 根肿病的防治措施 | 第17-20页 |
| 1.4.1 综合防控措施 | 第17-18页 |
| 1.4.2 化学防治 | 第18-19页 |
| 1.4.3 生物防治 | 第19页 |
| 1.4.4 抗病品种的培育 | 第19-20页 |
| 1.5 根肿病致病机理的研究 | 第20-23页 |
| 1.5.1 根肿病菌与寄主互作的研究 | 第20页 |
| 1.5.2 根肿病病程的激素调控研究 | 第20-23页 |
| 1.6 植物抗病机制 | 第23-25页 |
| 1.6.1 植物天然免疫 | 第23-24页 |
| 1.6.2 “基因对基因”学说 | 第24页 |
| 1.6.3 植物防御机理 | 第24-25页 |
| 1.7 植物病程差异表达基因的筛选 | 第25-28页 |
| 1.7.1 抑制差减杂交技术的主要原理 | 第25页 |
| 1.7.2 抑制差减杂交技术的操作流程 | 第25-26页 |
| 1.7.3 抑制差减杂交技术的优缺点 | 第26-28页 |
| 1.8 立题依据 | 第28-29页 |
| 1.9 研究内容和技术路线 | 第29-31页 |
| 1.9.1 研究内容 | 第29页 |
| 1.9.2 技术路线 | 第29-31页 |
| 1.10 本研究的创新点 | 第31-33页 |
| 2 利用抑制差减杂交技术筛选根肿菌侵染茎瘤芥差异表达基因 | 第33-57页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-44页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂及其配制 | 第33-35页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.4 茎瘤芥 RNA 的提取 | 第35页 |
| 2.2.5 cDNA 的合成与回收 | 第35-36页 |
| 2.2.6 抑制消减杂交 | 第36-39页 |
| 2.2.7 差减产物的克隆与文库构建 | 第39-41页 |
| 2.2.8 差异显示基因的测序和生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 2.2.9 实时荧光定量 qRT-pPCR 检测验证特定基因在根肿菌接种后的表达水平 | 第43-44页 |
| 2.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 2.3.1 茎瘤芥 RNA 的质量检测 | 第45页 |
| 2.3.2 茎瘤芥 cDNA 的合成及循环数优化 | 第45-46页 |
| 2.3.3 茎瘤芥抑制差减杂交 | 第46-48页 |
| 2.3.4 差减文库验证和分析 | 第48-50页 |
| 2.3.5 在抑制差减杂交文库中差异表达的基因分析 | 第50页 |
| 2.3.6 差异表达基因的荧光定量 PCR 验证结果 | 第50-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-57页 |
| 3 罹病茎瘤芥胁迫与防御反应基因的表达分析 | 第57-71页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 材料与方法 | 第57-59页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第57页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第58页 |
| 3.2.4 茎瘤芥根 RNA 的提取 | 第58页 |
| 3.2.5 反转录，合成单链 cDNA | 第58-59页 |
| 3.2.7 茎瘤芥胁迫与防御基因的 qPCR | 第59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-66页 |
| 3.3.1 根肿病菌侵染胁迫防御基因的表达 | 第59-62页 |
| 3.3.2 激素诱导后 CDPK5 和 PR4 基因的表达 | 第62-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-71页 |
| 4 乙烯反应转录因子 ERF 和病程相关蛋白基因 PR4 的全长克隆及生物信息学分析 | 第71-85页 |
| 4.1 材料与方法 | 第71-76页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第71页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第71页 |
| 4.1.3 引物设计与合成 | 第71-72页 |
| 4.1.4 乙烯反应转录因子 ERF 和病程相关蛋白基因 PR43' RACE 扩增 | 第72-74页 |
| 4.1.5 ERF 和 PR4 目的片段的扩增 | 第74-75页 |
| 4.1.6 生物信息学分析 | 第75-76页 |
| 4.2 结果与分析 | 第76-84页 |
| 4.2.1 ERF 和 PR4 的全长序列及分析 | 第76页 |
| 4.2.2 ERF 和 PR4 氨基酸序列预测及结构分析 | 第76-83页 |
| 4.2.3 ERF 和 PR4 系统进化分析 | 第83-84页 |
| 4.3 讨论 | 第84-85页 |
| 5 乙烯反应转录因子基因超表达载体的构建及遗传转化研究 | 第85-95页 |
| 5.1 材料与方法 | 第85-91页 |
| 5.1.1 材料 | 第85-87页 |
| 5.1.2 方法 | 第87-91页 |
| 5.2 结果与分析 | 第91-94页 |
| 5.2.1 pVCT2024 载体质粒酶切 | 第91页 |
| 5.2.2 线性化载体与插入片段的连接 | 第91-93页 |
| 5.2.3 转基因植株的筛选 | 第93-94页 |
| 5.3 讨论 | 第94-95页 |
| 6 主要结论与后续研究 | 第95-97页 |
| 6.1 主要结论 | 第95-96页 |
| 6.2 后续研究工作 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-111页 |
| 附录 | 第111-118页 |
| A. 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第111页 |
| B. 作者在攻读博士学位期间参加的科研项目 | 第111页 |
| C. 根肿病菌侵染过程中茎瘤芥上调表达基因 | 第111-118页 |
| D. 抑制差减杂交接头序列 | 第118页 |
