| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第17-49页 |
| 1.1 栖热菌及其噬菌体以及栖热菌噬菌体TSP4 | 第17-23页 |
| 1.1.1 栖热菌及其噬菌体 | 第17-18页 |
| 1.1.2 栖热菌噬菌体的简介 | 第18-20页 |
| 1.1.3 栖热菌噬菌体TSP4的特征 | 第20-23页 |
| 1.2 蛋白质的热稳定性研究进展 | 第23-31页 |
| 1.2.1 蛋白质的热稳定性 | 第23-24页 |
| 1.2.2 蛋白质热稳定性机制 | 第24-26页 |
| 1.2.2.1 蛋白质氨基酸序列的组成对其热稳定性的影响 | 第24-25页 |
| 1.2.2.2 分子内作用力对蛋白质热稳定的影响 | 第25-26页 |
| 1.2.2.3 蛋白质的构型对蛋白质热稳定性的影响 | 第26页 |
| 1.2.3 提高蛋白质热稳定性的方法 | 第26-30页 |
| 1.2.4 极端微生物中的热稳定性蛋白质 | 第30-31页 |
| 1.3 分子伴侣以及分子伴侣CPN47 | 第31-46页 |
| 1.3.1 分子伴侣 | 第31-32页 |
| 1.3.2 分子伴侣的分类 | 第32-38页 |
| 1.3.2.1 伴侣素家族(CPN) | 第32-34页 |
| 1.3.2.2 热休克蛋白70家族(Hsp70) | 第34页 |
| 1.3.2.3 热休克蛋白90家族(Hsp90) | 第34-35页 |
| 1.3.2.4 热休克蛋白100家族(Hsp100) | 第35-38页 |
| 1.3.3 分子伴侣的功能 | 第38-42页 |
| 1.3.3.1 分子伴侣参与应激反应 | 第38-39页 |
| 1.3.3.2 分子伴侣协助生物大分子的组装、折叠和降解 | 第39-40页 |
| 1.3.3.3 分子伴侣参与生物大分的转运和定位 | 第40页 |
| 1.3.3.4 分子伴侣参与遗传物质的复制转录 | 第40页 |
| 1.3.3.5 分子伴侣与生物信号转导 | 第40-41页 |
| 1.3.3.6 分子伴侣参与细胞器和细胞核结构的发生 | 第41页 |
| 1.3.3.7 分子伴侣参与细胞骨架的组装 | 第41-42页 |
| 1.3.3.8 分子伴侣参与细胞周期与凋亡的调控 | 第42页 |
| 1.3.4 高温菌中的分子伴侣 | 第42-44页 |
| 1.3.4.1 栖热菌中的分子伴侣 | 第43-44页 |
| 1.3.5 噬菌体的分子伴侣 | 第44页 |
| 1.3.6 分子伴侣CPN47 | 第44-46页 |
| 1.4 本论文的研究目的及意义 | 第46-49页 |
| 第二章 分子伴侣CPN47提高几种功能蛋白热稳定性的研究 | 第49-83页 |
| 2.1 分子伴侣CPN47及其他几种功能蛋白的制备 | 第49-53页 |
| 2.1.1 分子伴侣CPN47的制备 | 第49-53页 |
| 2.1.1.1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 2.1.2 与分子伴侣都来自噬菌体TSP4的酶蛋白lysin的制备 | 第53页 |
| 2.1.2.1 材料与方法 | 第53页 |
| 2.1.3 与分子伴侣都来自噬菌体TSP4的酶蛋白dUTPase的制备 | 第53页 |
| 2.1.3.1 材料与方法 | 第53页 |
| 2.1.4 胆碱酯酶的获得 | 第53页 |
| 2.2 分子伴侣CPN47提高其他几种功能蛋白热稳定性的作用 | 第53-60页 |
| 2.2.1 分子伴侣CPN47与同样来自噬菌体TSP4的酶蛋白lysin的作用 | 第54-56页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第54页 |
| 2.2.1.2 裂解酶lysin的活性检测方法 | 第54-55页 |
| 2.2.1.3 分子伴侣CPN47提高裂解酶lysin的催化活性的方法 | 第55-56页 |
| 2.2.2 分子伴侣CPN47与同样来自噬菌体TSP4的酶蛋白dUTPase的作用 | 第56-58页 |
| 2.2.2.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 2.2.2.2 dUTPase的活性检测方法 | 第57-58页 |
| 2.2.2.3 分子伴侣CPN47提高dUTPase的催化活性的方法 | 第58页 |
| 2.2.3 分子伴侣CPN47与常温酶蛋白胆碱酯酶的作用 | 第58-60页 |
| 2.2.3.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 2.2.3.2 不同温度下分子伴侣CPN47对酶活的保护 | 第59页 |
| 2.2.3.3 加入分子伴侣CPN47后时间对酶活的影响 | 第59-60页 |
| 2.2.3.4 加入分子伴侣CPN47后在强碱环境对酶活影响 | 第60页 |
| 2.2.3.5 分子伴侣CPN47的浓度对胆碱酯酶的活性的影响 | 第60页 |
| 2.3 分子伴侣CPN47提高大肠杆菌在高温下的成活率的研究 | 第60-61页 |
| 2.3.1 研究材料 | 第60页 |
| 2.3.2 研究方法 | 第60-61页 |
| 2.4 分子伴侣CPN47自身稳定性的研究 | 第61页 |
| 2.4.1 温度对分子伴侣CPN47的ATPase活性的影响 | 第61页 |
| 2.4.2 低温冷冻干燥对分子伴侣CPN47ATPase活性的影响 | 第61页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第61-83页 |
| 2.5.1 分子伴侣CPN47表达纯化电泳图 | 第62-63页 |
| 2.5.2 裂解酶lysin表达纯化电泳图 | 第63-64页 |
| 2.5.3 dUTPase表达纯化电泳图 | 第64-65页 |
| 2.5.4 分子伴侣CPN47与其同样来自噬菌体TSP4的酶蛋白lysin的作用结果 | 第65-69页 |
| 2.5.4.1 分子伴侣CPN47在高温下保护lysin作用结果 | 第65-66页 |
| 2.5.4.2 分子伴侣CPN47的浓度对裂解酶lysin酶活性的影响结果 | 第66-68页 |
| 2.5.4.3 分子伴侣CPN47在不同温度下对裂解酶lysin酶活性的影响结果 | 第68-69页 |
| 2.5.5 分子伴侣CPN47与其同样来自噬菌体TSP4的酶蛋白dUTPase的作用结果 | 第69-71页 |
| 2.5.5.1 分子伴侣CPN47浓度对dUTPase酶活性的影响结果 | 第69-70页 |
| 2.5.5.2 分子伴侣CPN47在不同温度下对dUTPase酶活性的影响结果 | 第70-71页 |
| 2.5.6 分子伴侣CPN47与外源胆碱酯酶的作用结果 | 第71-78页 |
| 2.5.6.1 不同温度下分子伴侣CPN47对酶活的保护结果 | 第71-73页 |
| 2.5.6.2 加入分子伴侣CPN47后时间对酶活的影响结果 | 第73-76页 |
| 2.5.6.3 加入分子伴侣CPN47后在强碱环境对酶活影响结果 | 第76-77页 |
| 2.5.6.4 分子伴侣CPN47的浓度对胆碱酯酶的活性的影响结果 | 第77-78页 |
| 2.5.7 分子伴侣CPN47自身稳定性研究结果 | 第78页 |
| 2.5.7.1 温度对分子伴侣CPN47的ATPase活性的影响结果 | 第78页 |
| 2.5.7.2 低温冷冻干燥对分子伴侣CPN47ATPase活性的影响结果 | 第78页 |
| 2.5.8 分子伴侣CPN47提高大肠杆菌在高温下的成活率的结果 | 第78-79页 |
| 2.5.9 讨论 | 第79-83页 |
| 第三章 分子伴侣CPN47与几种功能蛋白分子间相互作用的研究 | 第83-99页 |
| 3.1 实验材料 | 第83页 |
| 3.2 分子伴侣CPN47与其他几种功能蛋白分子之间相互作用的检测方法 | 第83-86页 |
| 3.2.1 分子伴侣CPN47与胆碱酯酶分子之间相互作用的研究方法 | 第83-84页 |
| 3.2.2 分子伴侣CPN47与dUTPase蛋白分子之间相互作用的研究方法 | 第84-86页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第86-99页 |
| 3.3.1 分子伴侣CPN47与胆碱酯酶分子之间相互作用的结果 | 第86-91页 |
| 3.3.2 分子伴侣CPN47与dUTPase蛋白分子之间的相互作用结果 | 第91-95页 |
| 3.3.3 讨论 | 第95-99页 |
| 第四章 总结与展望 | 第99-102页 |
| 4.1 总结 | 第99-100页 |
| 4.2 展望 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-112页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第112-113页 |
| 附录B 培养基、仪器及药品配制 | 第113-121页 |
| B.1 主要培养基配方 | 第113-114页 |
| B.1.1 DSM88液体培养基 | 第113-114页 |
| B.1.2 DSM88培养基固体培养基 | 第114页 |
| B.1.3 液体LB培养基 | 第114页 |
| B.1.4 固体LB培养基 | 第114页 |
| B.2 主要溶液及其配制 | 第114-118页 |
| B.2.1 Amp(100mg/ml) | 第114-115页 |
| B.2.2 Kana(100mg/ml) | 第115页 |
| B.2.3 溴化乙锭溶液 | 第115页 |
| B.2.4 1%琼脂糖凝胶的配制 | 第115页 |
| B.2.5 TAE电泳缓冲液 | 第115-116页 |
| B.2.5.1 50×TAE贮存液,pH约8.5 | 第115-116页 |
| B.2.5.2 1×TAE工作液 | 第116页 |
| B.2.6 30%(W/V)Acrylamide | 第116页 |
| B.2.7 10%(W/V)过硫酸铵 | 第116页 |
| B.2.8 SDS-PAGE5%浓缩胶 | 第116-117页 |
| B.2.9 SDS-PAGE12%分离胶 | 第117页 |
| B.2.10 考马斯亮蓝R-250染色液 | 第117页 |
| B.2.11 考马斯亮蓝染色脱色液 | 第117-118页 |
| B.2.12 5×LoadingBuffer | 第118页 |
| B.2.13 5×Tris-GlycineBuffer(SDS-PAGE电泳缓冲液) | 第118页 |
| B.3 主要仪器 | 第118-119页 |
| B.4 试剂及酶制品 | 第119-121页 |
