| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 木质纤维素 | 第10-11页 |
| 1.3 半纤维素 | 第11-12页 |
| 1.4 木聚糖 | 第12页 |
| 1.4.1 木聚糖的结构 | 第12页 |
| 1.4.2 木聚糖的水解 | 第12页 |
| 1.5 木聚糖水解酶 | 第12-16页 |
| 1.5.1 木聚糖水解酶的作用机理 | 第13页 |
| 1.5.2 木聚糖水解酶的应用现状 | 第13-14页 |
| 1.5.3 嗜热木聚糖水解酶及其在实际应用中的优势 | 第14-15页 |
| 1.5.4 国内外木聚糖水解酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 立题意义 | 第16页 |
| 1.7 研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 热解纤维素菌属Caldicellulosiruptor sp. F32中乙酰木聚糖酯酶Axe7的表征 | 第18-30页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.2.1 菌株、载体和相关药品 | 第18-19页 |
| 2.2.2 培养基 | 第19页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2.4 所用试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 目标基因的生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.3.2 引物设计及PCR扩增 | 第20页 |
| 2.3.3 PCR产物转化Trans1-T1感受态细胞 | 第20-21页 |
| 2.3.4 阳性克隆的筛选 | 第21页 |
| 2.3.5 阳性克隆质粒提取及转化蛋白表达菌株BL21（DE3） | 第21页 |
| 2.3.6 乙酰木聚糖脂酶Axe7的重组表达及提纯 | 第21-22页 |
| 2.3.7 乙酰木聚糖酯酶活性测定 | 第22页 |
| 2.3.8 乙酰木聚糖酯酶最适pH与最适温度 | 第22页 |
| 2.3.9 乙酰木聚糖酯酶热稳定性分析 | 第22页 |
| 2.3.10 乙酰木聚糖酯酶Km和kcat等催化常数和酶动力学曲线 | 第22页 |
| 2.3.11 乙酰木聚糖酯酶催化位点的鉴定、突变体的制备实验 | 第22-23页 |
| 2.4 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.4.1 Axe7的基本信息和结构同源建模分析 | 第23-24页 |
| 2.4.2 Axe7的质粒制备和蛋白表达纯化 | 第24-25页 |
| 2.4.3 Axe7的酶学性质研究 | 第25-26页 |
| 2.4.4Axe7活性中心鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 2.6 本章小结 | 第28-30页 |
| 第三章 热解纤维素菌属C. saccharolyticus中β-木糖苷酶CsXyl39A和CsXyl39B的表征 | 第30-48页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌株、载体和相关药品 | 第30页 |
| 3.2.2 培养基 | 第30-31页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第31页 |
| 本章所用主要实验仪器同 2.2.3 所述。 | 第31页 |
| 3.2.4 所用试剂 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.3.1 目标基因的生物信息学分析 | 第31页 |
| 3.3.2 质粒构建与蛋白表达 | 第31页 |
| 3.3.3 目的蛋白的提纯 | 第31页 |
| 3.3.4 重组蛋白分子量及自然状态下存在形式检测 | 第31-32页 |
| 3.3.5 木糖苷酶活力测定 | 第32页 |
| 3.3.6 木糖苷酶最适pH和最适温度 | 第32页 |
| 3.3.7 木糖苷酶热稳定性分析 | 第32页 |
| 3.3.8 两种木糖苷酶突变体制备 | 第32-33页 |
| 3.3.9 木糖苷酶Km和kcat等催化常数的测定 | 第33-34页 |
| 3.3.10 不同金属离子或变性剂对木糖苷酶酶活影响分析 | 第34页 |
| 3.3.11 有机溶剂对木糖苷酶酶活影响分析 | 第34页 |
| 3.3.12 有机溶剂对木糖苷酶酶热稳定性以及催化效率影响分析 | 第34页 |
| 3.3.13 木糖及葡萄糖对木糖苷酶酶酶活影响分析 | 第34页 |
| 3.4 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.4.1 木糖苷酶基本生物学信息 | 第34-38页 |
| 3.4.2 木糖苷酶寡聚状态分析 | 第38-39页 |
| 3.4.3 木糖苷酶酶学性质研究 | 第39-41页 |
| 3.4.4 影响木糖苷酶寡聚状态及稳定性的原因探究 | 第41-43页 |
| 3.4.5 不同化学试剂对木糖苷酶酶活的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.6 有机溶剂对木糖苷酶酶学特性的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.7 木糖和葡萄糖对木糖苷酶酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-47页 |
| 3.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 β-木糖苷酶CsXyl39A和CsXyl39B实际应用的研究 | 第48-56页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48页 |
| 4.2.1 相关药品 | 第48页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2.3 所用试剂 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.3.1 木糖苷酶水解低聚木糖 | 第48-49页 |
| 4.3.2 木糖苷酶与内切木聚糖酶协同作用 | 第49页 |
| 4.3.3 木糖苷酶固定化 | 第49页 |
| 4.3.4 木糖苷酶水解三七皂苷R1 | 第49-50页 |
| 4.4 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.4.1 木糖苷酶对低聚木糖的水解 | 第50页 |
| 4.4.2 木糖苷酶与内切木聚糖酶的协同作用 | 第50-51页 |
| 4.4.3 固定化对木糖苷酶酶学性质的影响 | 第51-53页 |
| 4.4.4 木糖苷酶水解三七皂苷R1结果分析 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-55页 |
| 4.6 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 5.1 总结 | 第56-57页 |
| 5.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第65-66页 |
| 附录英文缩略词说明 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
