| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要（一) | 第6-8页 |
| 英文摘要（1) | 第8-10页 |
| 中文摘要（二） | 第10-12页 |
| 英文摘要（2) | 第12-14页 |
| 中文摘要（三） | 第14-16页 |
| 英文摘要（3) | 第16-18页 |
| 目录 | 第18-25页 |
| 第一部分 p53信号通路调控钩端螺旋体感染引起的巨噬细胞周期阻滞及凋亡机制研究 | 第25-75页 |
| 1 引言 | 第25-28页 |
| 2 钩端螺旋体感染激活巨噬细胞p53信号通路的情况及其作用机制 | 第28-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 主要试剂配制方法 | 第28页 |
| 2.1.4 菌株及细胞系 | 第28-29页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.1.5.1 问号钩体感染细胞模型 | 第29页 |
| 2.1.5.2 细胞活性氧ROS的测定 | 第29页 |
| 2.1.5.3 细胞内钩端螺旋体的检测 | 第29-30页 |
| 2.1.5.4 吞噬泡内钩端螺旋体的检测 | 第30页 |
| 2.1.5.5 细胞DNA损伤即53BP1蛋白核转位及H2AX磷酸化的检测 | 第30-31页 |
| 2.1.5.6 Western blot检测P53及Akt蛋白蛋白磷酸化 | 第31页 |
| 2.1.5.7 siRNA基因沉默及蛋白抑制剂阻断信号通路 | 第31页 |
| 2.1.5.8 统计学方法 | 第31页 |
| 2.2 实验结果 | 第31-42页 |
| 2.2.1 问号钩体感染前后巨噬细胞活性氧ROS变化 | 第31-33页 |
| 2.2.2 ROS清除剂不影响感染过程中问号钩体的活性 | 第33-34页 |
| 2.2.3 ROS清除剂不影响问号钩体感染巨噬细胞细胞内吞噬泡的形成 | 第34-35页 |
| 2.2.4 问号钩体感染前后细胞DNA损伤情况 | 第35-40页 |
| 2.2.5 问号钩体感染前后细胞Akt和p53磷酸化活化情况 | 第40-42页 |
| 3 钩端螺旋体感染巨噬细胞前后细胞周期变化及其调控机制 | 第42-51页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第42页 |
| 3.1.3 主要试剂配制方法 | 第42页 |
| 3.1.4 菌株及细胞系 | 第42页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.1.5.1 问号钩体感染细胞模型 | 第42页 |
| 3.1.5.2 细胞周期的测定 | 第42-43页 |
| 3.1.5.3 实时荧光定量RT-PCR | 第43-44页 |
| 3.1.5.4 Western blot检测蛋白表达 | 第44页 |
| 3.1.5.5 siRNA干扰基因沉默及蛋白抑制剂阻断信号通路 | 第44页 |
| 3.1.5.6 统计学方法 | 第44-45页 |
| 3.2 实验结果 | 第45-51页 |
| 3.2.1 问号钩体感染前后细胞周期变化 | 第45-47页 |
| 3.2.2 问号钩体感染前后细胞周期调控基因mRNA水平变化 | 第47-48页 |
| 3.2.3 问号钩体感染前后细胞周期调控蛋白水平变化 | 第48-51页 |
| 4 钩端螺旋体感染巨噬细胞前后凋亡情况及其调控机制 | 第51-64页 |
| 4.1 材料与方法 | 第51-54页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂配制方法 | 第51页 |
| 4.1.4 菌株及细胞系 | 第51页 |
| 4.1.5 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.1.5.1 问号钩体感染细胞模型 | 第51页 |
| 4.1.5.2 细胞凋亡的测定 | 第51-52页 |
| 4.1.5.3 实时荧光定量RT-PCR | 第52-53页 |
| 4.1.5.4 Western bolt检测蛋白表达 | 第53页 |
| 4.1.5.5 AIF、EndoG、HtrA2及Smac从线粒体释放检测 | 第53页 |
| 4.1.5.6 Fas、FasL蛋白表达及分布检测 | 第53页 |
| 4.1.5.7 siRNA基因沉默及蛋白抑制剂阻断信号通路 | 第53-54页 |
| 4.1.5.8 统计学方法 | 第54页 |
| 4.2 实验结果 | 第54-64页 |
| 4.2.1 问号钩体感染前后细胞凋亡变化 | 第54-56页 |
| 4.2.2 问号钩体感染前后细胞凋亡调控基因mRNA水平变化 | 第56-58页 |
| 4.2.3 问号钩体感染前后细胞凋亡调控蛋白水平变化 | 第58-59页 |
| 4.2.4 问号钩体感染过程中细胞AIF、EndoG、HtrA2及Smac从线粒体释放情况 | 第59-62页 |
| 4.2.5 问号钩体感染过程中Fas及FasL蛋白表达及分布情况 | 第62-64页 |
| 5 讨论 | 第64-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 第二部分 问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白优势T-B联合抗原表位的鉴定 | 第75-118页 |
| 1 引言 | 第75-79页 |
| 2 问号钩端螺旋体属特异性候选蛋白抗原的筛选 | 第79-86页 |
| 2.1 材料与方法 | 第79-82页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第79页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第79页 |
| 2.1.3 主要试剂配制方法 | 第79页 |
| 2.1.4 菌株,细胞系及培养方式 | 第79-80页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第80-82页 |
| 2.1.5.1 问号钩体基因组DNA的提取 | 第80页 |
| 2.1.5.2 问号钩体属特异性候选基因PCR扩增 | 第80-81页 |
| 2.1.5.3 扩增产物测序及分析 | 第81页 |
| 2.1.5.4 问号钩体属特异性候选基因跨膜结构域分析 | 第81页 |
| 2.1.5.5 问号钩体属特异性候选基因实时荧光定量RT-PCR分析 | 第81-82页 |
| 2.2 实验结果 | 第82-86页 |
| 2.2.1 ligB、loa22、lipL32、groEL、lenA基因携带率及分布 | 第82-83页 |
| 2.2.2 ligB、loa22、lipL32、groEL、lenA基因保守率 | 第83页 |
| 2.2.3 LigB、Loa22、LipL32、GroEL、LenA蛋白结构预测 | 第83-84页 |
| 2.2.4 感染状态下ligB、loa22、lipL32、groEL、lenA基因表达水平变化 | 第84-86页 |
| 3 问号钩端螺旋体属特异性候选外膜蛋白重组表达和纯化 | 第86-91页 |
| 3.1 材料与方法 | 第86-88页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第86页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第86页 |
| 3.1.3 主要试剂配制方法 | 第86页 |
| 3.1.4 菌株及培养方式 | 第86页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第86-88页 |
| 3.1.5.1 问号钩体属特异性候选基因信号肽预测 | 第86页 |
| 3.1.5.2 问号钩体属特异性候选基因原核表达系统构建及鉴定 | 第86-88页 |
| 3.1.5.3 目的重组蛋白表达与纯化 | 第88页 |
| 3.1.5.4 目的重组蛋白抗血清制备 | 第88页 |
| 3.2 实验结果 | 第88-91页 |
| 3.2.1 LigB、Loa22、LipL32、GroEL、LenA蛋白信号肽预测 | 第88-89页 |
| 3.2.2 rLigB、rLoa22、rLipL32、rGroEL、rLenA蛋白重组表达效果 | 第89-90页 |
| 3.2.3 rLigB、rLoa22、rLipL32、rGroEL、rLenA蛋白抗血清效价 | 第90-91页 |
| 4 问号钩端螺旋体属特异性候选蛋白T、B表位预测 | 第91-99页 |
| 4.1 材料与方法 | 第91页 |
| 4.1.1 实验方法 | 第91页 |
| 4.2 实验结果 | 第91-99页 |
| 4.2.1 LigB、Loa22、LipL32、GroEL、LenA蛋白B表位预测 | 第91-94页 |
| 4.2.2 LigB、Loa22、LipL32、GroEL、LenA蛋白T表位预测 | 第94-97页 |
| 4.2.3 LigB、Loa22、LipL32、GroEL、LenA蛋白T-B联合表位预测 | 第97-99页 |
| 5 问号钩端螺旋体属特异性候选蛋白优势T-B联合表位筛选 | 第99-109页 |
| 5.1 材料与方法 | 第99-104页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第99页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第99页 |
| 5.1.3 主要试剂配制方法 | 第99页 |
| 5.1.4 菌株及培养方式 | 第99页 |
| 5.1.5 实验方法 | 第99-104页 |
| 5.1.5.1 含表位肽段编码基因的基因扩增及T-A克隆载体的构建 | 第99-102页 |
| 5.1.5.2 M13KE展示肽系统的构建和鉴定 | 第102页 |
| 5.1.5.3 噬菌体颗粒的收集及浓度测定 | 第102页 |
| 5.1.5.4 问号钩端螺旋体抗血清制备 | 第102-103页 |
| 5.1.5.5 Western blot方法筛选优势T-B联合表位 | 第103页 |
| 5.1.5.6 酶联免疫吸附方法筛选优势T-B联合表位 | 第103页 |
| 5.1.5.7 优势T-B联合表位在各流行钩体血清群中序列分析 | 第103-104页 |
| 5.2 实验结果 | 第104-109页 |
| 5.2.1 T-B联合表位重组噬菌体Western blot筛选结果 | 第104-105页 |
| 5.2.2 合成T-B联合表位肽免疫反应性筛选结果 | 第105-107页 |
| 5.2.3 优势T-B联合表位序列保守性分析结果 | 第107-109页 |
| 6 讨论 | 第109-113页 |
| 参考文献 | 第113-118页 |
| 第三部分 问号钩端螺旋体FhlA-RpoN通路调控靶基因表达的作用及机制研究 | 第118-138页 |
| 1 引言 | 第118-120页 |
| 2 问号钩端螺旋体FhlA-RpoN信号通路转录调控靶基因的预测与筛选 | 第120-129页 |
| 2.1 材料与方法 | 第120-124页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第120页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第120页 |
| 2.1.3 主要试剂配制方法 | 第120页 |
| 2.1.4 菌株及培养方式 | 第120页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第120-124页 |
| 2.1.5.1 问号钩体RpoN信号通路转录调控基因的预测 | 第120-121页 |
| 2.1.5.2 问号钩体rpoN,fhlA,atoC基因克隆、蛋白表达及纯化 | 第121-122页 |
| 2.1.5.3 凝胶迁移实验 | 第122-123页 |
| 2.1.5.4 问号钩体△fhlA株中FhlA-RpoN信号通路转录调控靶基因qRT-PCR实验 | 第123-124页 |
| 2.2 实验结果 | 第124-129页 |
| 2.2.1 问号钩体RpoN信号通路转录调控基因的预测 | 第124-126页 |
| 2.2.2 问号钩体rpoN,fhlA,atoC基因克隆,表达及纯化结果 | 第126-127页 |
| 2.2.3 重组RpoN蛋白与候选基因结合序列EMSA结果 | 第127-128页 |
| 2.2.4 问号钩体△fhlA株与野生株中FhlA-RpoN信号通路转录调控的候选基因mRNA水平变化 | 第128-129页 |
| 3 问号钩端螺旋体△fhlA突变株与野生株表型差异 | 第129-134页 |
| 3.1 材料与方法 | 第129-130页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第129页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第129页 |
| 3.1.3 主要试剂配制方法 | 第129页 |
| 3.1.4 菌株及培养方式 | 第129页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第129-130页 |
| 3.1.5.1 问号钩体△fhlA突变株与野生株的生长特点分析 | 第129-130页 |
| 3.1.5.2 问号钩体△fhlA突变株与野生株的菌体长度分析 | 第130页 |
| 3.1.5.3 问号钩体△fhlA突变株与野生株的外膜蛋白Western blot分析 | 第130页 |
| 3.2 实验结果 | 第130-134页 |
| 3.2.1 问号钩体△fhlA突变株与野生株生长比较结果 | 第130-132页 |
| 3.2.2 问号钩体△fhlA突变株与野生株菌体外形比较结果 | 第132页 |
| 3.2.3 问号钩体野生型与突变型外膜蛋白结果 | 第132-134页 |
| 4 讨论 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-138页 |
| 综述 中国钩端螺旋体病流行特征及防治研究进展 | 第138-150页 |
| 1. 流行病学研究 | 第138-141页 |
| 1.1. 流行情况 | 第138-139页 |
| 1.2. 流行地域及季节 | 第139-140页 |
| 1.3. 患者性别、年龄及职业分布 | 第140页 |
| 1.4. 宿主 | 第140-141页 |
| 1.5. 流行菌群 | 第141页 |
| 2. 临床表现 | 第141-142页 |
| 3. 诊断方法 | 第142-143页 |
| 4. 防治方法 | 第143-144页 |
| 5. 展望 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-150页 |
| 附录 | 第150-160页 |
| 主要试剂 | 第150-156页 |
| 主要仪器 | 第156-158页 |
| 主要溶液配制方法 | 第158-160页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第160-162页 |
