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长穗偃麦草中AP2/EREBP类转录因子基因的克隆与功能验证

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
1 综述第10-21页
   ·逆境胁迫对植物的损害第10-14页
     ·干旱胁迫对植物的损害第10-11页
     ·高盐胁迫对植物的损害第11-13页
     ·低温胁迫对植物的损害第13-14页
   ·逆境胁迫下植物细胞的信号传导第14-16页
   ·植物AP2/EREBP 转录因子家族第16-19页
     ·转录因子概述第16-17页
     ·植物AP2/EREBP 转录因子家族第17页
     ·EREBP 转录因子在植物抗逆中的作用第17-18页
     ·AP2/EREBP 转录因子与植物进化的关系第18-19页
   ·本研究的内容和意义第19-21页
2 材料和方法第21-42页
   ·试验材料第21-22页
     ·植物材料第21页
     ·菌株及质粒载体第21页
     ·酶和试剂第21页
     ·主要仪器第21-22页
   ·方法第22-42页
     ·长穗偃麦草cDNA 第一条链获得方法第22-23页
     ·长穗偃麦草基因组DNA 的提取第23-24页
     ·EeAP2.2 基因的克隆第24-30页
     ·EeAP2-1.1 基因的克隆第30-32页
     ·EeAP2.2 基因真核表达载体构建第32-34页
     ·EeAP2-1.1 基因真核表达载体构建第34页
     ·烟草的遗传转化第34-37页
     ·酵母单杂交验证EeAP2.2 编码的蛋白与DRE 顺式作用元件的结合第37-40页
     ·茎尖法小麦转EeAP2-1.1 基因第40页
     ·EeAP2.2 和EeAP2-1.1 基因编码蛋白的生物信息学分析第40-42页
3 结果与分析第42-57页
   ·长穗偃麦草EeAP2.2 基因的克隆第42-46页
     ·长穗偃麦草总RNA 检测第42页
     ·EeAP2.2 RT-PCR 扩增结果第42-43页
     ·EeAP2.2 基因3'_RACE 扩增结果第43页
     ·EeAP2.2 基因 Genome Walking 扩增结果第43-44页
     ·测序结果的分析,拼接及ORF 框的扩增第44-46页
   ·长穗偃麦草EeAP2-1.1 基因的克隆第46-47页
     ·EeAP2-1.1 基因开放读码框的扩增结果第46-47页
     ·EeAP2-1.1 基因3'_RACE 扩增结果第47页
   ·EeAP2.2 基因真核表达载体的构建第47-49页
     ·获得完整目的基因片段的BamHⅠ酶切条件摸索第47-48页
     ·EeAP2.2 真核表达载体的构建及酶切鉴定第48-49页
   ·EeAP2-1.1 基因真核表达载体的构建第49-50页
     ·获得完整目的基因片段的BamHⅠ酶切条件摸索第49-50页
     ·EeAP2-1.1 真核表达载体的构建及酶切鉴定第50页
   ·EeAP2-1.1 和EeAP2.2 转化农杆菌C58 的阳性克隆鉴定第50页
   ·PCR 检测卡那抗性烟草植株第50-52页
   ·组织化学法检测GUS 基因的表达第52页
   ·酵母单杂交第52-55页
     ·用于构建AD 融合表达载体的EeAP2.2 基因ORF 框的扩增结果第52-53页
     ·pGAD- EeAP2.2 的构建及鉴定结果第53-54页
     ·酵母转化子的PCR 鉴定第54页
     ·EeAP2.2 转录激活作用的验证第54-55页
   ·茎尖法小麦转EeAP2-1.1 基因第55页
   ·EeAP2.2 及EeAP2-1.1 基因生物信息学分析第55-57页
     ·EeAP2.2 编码的氨基酸序列与其他植物氨基酸序列同源性的比较第55页
     ·EeAP2-1.1 编码的氨基酸序列与其他植物氨基酸序列同源性的比较第55-57页
4 讨论第57-62页
   ·关于基因克隆第57-58页
   ·关于部分双酶切第58-59页
   ·关于酵母单杂交第59页
   ·关于长穗偃麦草AP2/EREBP 家族的转录因子第59-61页
   ·关于茎尖法小麦转基因第61-62页
5 结论第62-63页
参考文献第63-67页
在读期间发表论文第67-68页
作者简历第68-69页
致谢第69-70页
附录I:试验中载体构建流程图第70-71页

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