| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第9-20页 |
| 1.1 德氏乳杆菌保加利亚亚种研究现状 | 第9-11页 |
| 1.1.1 德氏乳杆菌保加利亚亚种的生理功能 | 第9-10页 |
| 1.1.2 德氏乳杆菌保加利亚亚种的应用概况 | 第10-11页 |
| 1.2 构建微生物突变体的方法概述 | 第11-14页 |
| 1.2.1 物理诱变 | 第11-12页 |
| 1.2.2 化学诱变 | 第12页 |
| 1.2.3 基因工程方法 | 第12-14页 |
| 1.3 pGhost9:ISS1 概述 | 第14-16页 |
| 1.3.1 随机插入突变体的分离及载体部分的剔除 | 第14页 |
| 1.3.2 载体的插入结构 | 第14-15页 |
| 1.3.3 突变体染色体 DNA 的分析 | 第15-16页 |
| 1.3.4 插入位点旁侧序列的克隆 | 第16页 |
| 1.3.5 pGhost9:ISS1 系统的应用 | 第16页 |
| 1.4 乳酸菌食品级筛选标记 | 第16-19页 |
| 1.5 弱后酸化菌株概述 | 第19页 |
| 1.6 本文研究的内容和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料 | 第20-26页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.2 培养基 | 第20-22页 |
| 2.3 生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.3.1 主要生化试剂 | 第22页 |
| 2.3.2 主要分子生物学试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.5 主要试剂及药品的配制 | 第23-25页 |
| 2.6 引物设计 | 第25-26页 |
| 3 试验方法 | 第26-34页 |
| 3.1 构建 Lb-MH 突变体库 | 第26-29页 |
| 3.1.1 提取质粒 pGhost9:ISS1 | 第26页 |
| 3.1.2 酶切验证质粒 pGhost9:ISS1 | 第26-27页 |
| 3.1.3 Lb-MH 菌株电转化和转化子的筛选 | 第27-28页 |
| 3.1.4 Lb-MH 转化子的插入突变及载体的消除 | 第28-29页 |
| 3.1.5 转座突变率 | 第29页 |
| 3.2 Lb-MH 菌株 thyA 缺陷型的筛选 | 第29-31页 |
| 3.2.1 筛选方法 | 第29页 |
| 3.2.2 thyA 缺陷型的鉴定 | 第29-31页 |
| 3.2.3 分光光度法绘制 thyA 基因缺陷型菌株在 SA 中的生长曲线 | 第31页 |
| 3.2.4 thyA 缺陷型菌株的遗传稳定性 | 第31页 |
| 3.3 弱后酸化 Lb-MH 菌株的筛选 | 第31-34页 |
| 3.3.1 青霉素处理浓度的筛选 | 第31页 |
| 3.3.2 弱后酸化菌株的筛选 | 第31-32页 |
| 3.3.3 弱后酸化突变株 ISS1 插入的 PCR 验证 | 第32页 |
| 3.3.4 弱后酸化菌株基因组中载体部分的剔除 | 第32页 |
| 3.3.5 发酵性能测试 | 第32页 |
| 3.3.6 紫外分光光度法绘制弱后酸化菌株 MRS 中的生长曲线 | 第32-33页 |
| 3.3.7 贮藏期 pH 值和滴定酸度的变化 | 第33页 |
| 3.3.8 统计分析 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-46页 |
| 4.1 质粒 pGhost9:ISS1 的提取及酶切验证 | 第34-35页 |
| 4.2 质粒 pGhost9:ISS1 转化 Lb-MH 菌株 | 第35-37页 |
| 4.2.1 分光光度法绘制 Lb-MH 菌株的生长曲线 | 第35页 |
| 4.2.2 Lb-MH 菌株转化子的筛选 | 第35-36页 |
| 4.2.3 质粒 pGhost9:ISS1 的提取 | 第36-37页 |
| 4.3 转座突变率 | 第37页 |
| 4.4 Lb-MH 菌株 thyA 缺陷型的筛选 | 第37-40页 |
| 4.4.1 thyA 缺陷型的筛选 | 第37-38页 |
| 4.4.2 Lb-MH 菌株 thyA 基因缺陷型的鉴定 | 第38-40页 |
| 4.4.3 Lb-MH 菌株 thyA 基因缺陷型菌株在 SA 中的生长曲线 | 第40页 |
| 4.4.4 Lb-MH 菌株 thyA 基因缺陷型的稳定性 | 第40页 |
| 4.5 弱后酸化菌株的筛选 | 第40-46页 |
| 4.5.1 青霉素处理时间的确定 | 第40-41页 |
| 4.5.2 弱后酸化菌株的筛选 | 第41页 |
| 4.5.3 弱后酸化突变株 ISS1 插入的 PCR 验证 | 第41-42页 |
| 4.5.4 发酵能力测试 | 第42页 |
| 4.5.5 突变株载体部分的剔除 | 第42-43页 |
| 4.5.6 弱后酸化菌株的生长曲线和 pH 值的变化情况 | 第43-44页 |
| 4.5.7 突变菌株后酸化验证试验 | 第44-45页 |
| 4.5.8 突变型菌株的遗传稳定性试验 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-51页 |
| 5.1 质粒 pGhost9:ISS1 | 第46页 |
| 5.2 质粒 pGhost9:ISS1 电转化入 Lb-MH 菌株 | 第46-47页 |
| 5.3 利用插入序列 ISS1 构建突变体库 | 第47页 |
| 5.4 筛选 thyA 缺陷型菌株 | 第47-49页 |
| 5.5 弱后酸化菌株的筛选 | 第49-51页 |
| 6 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
