| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| 一、结直肠癌的表观遗传学研究 | 第14-17页 |
| 1．结直肠癌概述 | 第14-15页 |
| 2. 表观遗传学概述 | 第15-16页 |
| 3. 结直肠癌的表观遗传学研究现状 | 第16-17页 |
| 二、RASSF10 基因概况 | 第17-18页 |
| 1. RASSF10 基因结构和功能 | 第17页 |
| 2. RASSF10 与肿瘤 | 第17-18页 |
| 三、本研究的目的、内容及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 RASSF10 在结直肠癌中的表达受启动子区甲基化状态调控 | 第20-41页 |
| 第一节 材料试剂 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试剂及耗材 | 第21-23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 第二节 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 细胞培养及 5-aza-dc 处理 | 第24页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.4 基因组 DNA 提取 | 第26页 |
| 2.2.5 组织 DNA 的提取和 MSP | 第26-27页 |
| 2.2.6 制备 MSP 阳性对照 DNA（In vitro methyated DNA,IVD） | 第27页 |
| 2.2.7 非甲基化阳性对照 | 第27页 |
| 2.2.8 DNA 亚硫酸盐处理及 MSP | 第27-28页 |
| 2.2.9 DNA 硫化测序 | 第28-30页 |
| 2.2.10 免疫组化 | 第30-32页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第32页 |
| 第三节 结果 | 第32-37页 |
| 2.3.1 结直肠癌细胞系 RASSF10 基因的表达检测 | 第32页 |
| 2.3.2 结直肠癌细胞系 RASSF10 基因突变的检测 | 第32-33页 |
| 2.3.3 结直肠癌细胞系 RASSF10 基因启动子区甲基化检测 | 第33-34页 |
| 2.3.4 RASSF10 在原发性结直肠癌组织中的甲基化状态 | 第34-35页 |
| 2.3.5 RASSF10 甲基化状态与临床病理特点的相关性分析 | 第35-36页 |
| 2.3.6 RASSF10 在原发性结直肠癌及癌旁组织中的表达差异 | 第36-37页 |
| 第四节 讨论 | 第37-39页 |
| 第五节 小结 | 第39-41页 |
| 第三章 RASSF10 抑癌作用的体内外实验研究 | 第41-63页 |
| 第一节 试剂材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第41-43页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第43页 |
| 第二节 实验方法 | 第43-55页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 3.2.2 RASSF10 真核表达载体的构建 | 第43-48页 |
| 3.2.3 质粒转染 | 第48-49页 |
| 3.2.4 细胞增殖实验 | 第49-50页 |
| 3.2.5 克隆形成实验 | 第50页 |
| 3.2.6 细胞凋亡及周期检测 | 第50-51页 |
| 3.2.7 细胞总蛋白提取与定量 | 第51页 |
| 3.2.8 Western blot | 第51-53页 |
| 3.2.9 RASSF10 裸鼠体内成瘤实验 | 第53-54页 |
| 3.2.10 裸鼠肿瘤的 H&E 染色和免疫组化实验 | 第54页 |
| 3.2.11 药物敏感性检测 | 第54-55页 |
| 第三节 实验结果 | 第55-60页 |
| 3.3.1 RASSF10 基因对细胞生长及克隆形成能力的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.2 RASSF10 对结直肠癌细胞系凋亡的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 RASSF10 对结直肠癌细胞系周期的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.4 RASSF10 对裸鼠体内成瘤情况的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.5 RASSF10 的表达对多西他赛药物敏感性的影响 | 第59-60页 |
| 第四节 讨论 | 第60-61页 |
| 第五节 小结 | 第61-63页 |
| 第四章 RASSF10 对 P53 信号通路的作用 | 第63-74页 |
| 第一节 试剂材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.1.2 试剂及耗材 | 第63-64页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第64页 |
| 第二节 实验方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 细胞培养及总 RNA 提取 | 第64-65页 |
| 4.2.2 基因芯片测序分析 | 第65页 |
| 4.2.3 芯片结果验证 | 第65页 |
| 4.2.4 P53 信号通路验证 | 第65-66页 |
| 第三节 实验结果 | 第66-72页 |
| 4.3.1 基因芯片测序结果 | 第66-68页 |
| 4.3.2 RNA 水平验证测序结果 | 第68页 |
| 4.3.3 RASSF10 基因对 P53 信号通路的作用 | 第68-72页 |
| 第四节 讨论 | 第72-73页 |
| 第五节 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 文献综述 | 第80-96页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
