| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 蛴螬的危害与防治 | 第9-10页 |
| 1.1.1 蛴螬的危害 | 第9-10页 |
| 1.1.2 蛴螬的防治 | 第10页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌 | 第10-15页 |
| 1.2.1 Bt杀虫蛋白 | 第10-11页 |
| 1.2.2 杀虫晶体蛋白及命名 | 第11-12页 |
| 1.2.3 3d-Cry蛋白结构与功能 | 第12-14页 |
| 1.2.4 3d-Cry蛋白的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.5 Cry蛋白受体的鉴定 | 第15页 |
| 1.3 营养期杀虫蛋白(Vegetative insecticidal proteins,VIPs) | 第15-19页 |
| 1.3.1 二元毒素Vip1/Vip2 | 第16-18页 |
| 1.3.2 Vip3蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4 对蛴螬具有杀虫活性的Bt菌株及基因 | 第19页 |
| 1.5 本研究的立题依据、目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 Vip1/Vip2蛋白的提取、纯化及生物活性测定 | 第21-48页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 供试昆虫 | 第21-22页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基与抗生素 | 第22页 |
| 2.1.5 常用溶液与缓冲液 | 第22-25页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 Vip1Ad1、Vip2Ag1蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 蛋白的SDS-PAGE检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3 离子交换层析纯化Vip1Ad1、Vip2Ag1蛋白 | 第28-29页 |
| 2.2.4 Vip1Ad1、Vip2Ag1蛋白体外消化 | 第29页 |
| 2.2.5 圆二色谱 | 第29页 |
| 2.2.6 热稳定性检测 | 第29页 |
| 2.2.7 体外模拟胃液稳定性检测 | 第29-30页 |
| 2.2.8 体外模拟肠液稳定性检测 | 第30页 |
| 2.2.9 生物活性测定 | 第30-32页 |
| 2.2.10 组织病理学观察 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-45页 |
| 2.3.1 Bt分泌蛋白Vip1Ad1、Vip2Ag1的提取 | 第33-36页 |
| 2.3.2 Vip1Ad1、Vip2Ag1蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| 2.3.3 Vip1Ad1、Vip2Ag1体外消化 | 第38-39页 |
| 2.3.4 圆二色谱测定 | 第39-40页 |
| 2.3.5 热稳定性检测 | 第40-41页 |
| 2.3.6 体外模拟胃肠液消化稳定性检测 | 第41-43页 |
| 2.3.7 生物活性测定 | 第43-44页 |
| 2.3.8 Vip1Ad1、Vip2Ag1蛋白对暗黑鳃金龟组织病理学影响 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-48页 |
| 第三章 Vip1/Vip2蛋白与蛴螬BBMV结合分析 | 第48-72页 |
| 3.1 试验材料 | 第48-50页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第48页 |
| 3.1.2 供试昆虫 | 第48页 |
| 3.1.3 酶与生化试剂 | 第48页 |
| 3.1.4 培养基与抗生素 | 第48页 |
| 3.1.5 常用溶液与缓冲液 | 第48-50页 |
| 3.1.6 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.2 试验方法 | 第50-54页 |
| 3.2.1 蛋白制备 | 第50-51页 |
| 3.2.2 蛋白生物素标记及Western blot检测标记效果 | 第51页 |
| 3.2.3 蛋白荧光标记 | 第51-52页 |
| 3.2.4 BBMV的提取 | 第52页 |
| 3.2.5 蛋白与BBMV的结合分析 | 第52-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-70页 |
| 3.3.1 BBMV的提取 | 第54页 |
| 3.3.2 Vip1Ad1/Vip2Ag1蛋白与大黑鳃金龟BBMV结合模式分析 | 第54-59页 |
| 3.3.3 标记的Vip1Ad1/Vip2Ag1蛋白与大黑鳃金龟BBMV动力学分析 | 第59-64页 |
| 3.3.4 荧光标记的Vip蛋白与非标记Cry8-like蛋白的竞争结合分析 | 第64-65页 |
| 3.3.5 Vip1Ad1蛋白在大黑鳃金龟BBMV上结合蛋白的鉴定 | 第65-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-71页 |
| 3.5 小结 | 第71-72页 |
| 第四章 Cry8蛋白与大黑鳃金龟BBMV的结合及其中肠结合蛋白的鉴定 | 第72-83页 |
| 4.1 试验材料 | 第72-73页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第72页 |
| 4.1.2 供试昆虫 | 第72页 |
| 4.1.3 酶与生化试剂 | 第72页 |
| 4.1.4 培养基与抗生素 | 第72页 |
| 4.1.5 常用溶液与缓冲液 | 第72-73页 |
| 4.1.6 主要仪器设备 | 第73页 |
| 4.2 试验方法 | 第73-75页 |
| 4.2.1 蛋白制备 | 第73页 |
| 4.2.2 蛋白荧光标记 | 第73页 |
| 4.2.3 BBMV的提取 | 第73页 |
| 4.2.4 DyLight488-labeled Cry8-like与大黑鳃金龟BBMV的饱和结合分析 | 第73页 |
| 4.2.5 DyLight488-labeled Cry8-like与Cry8Ga的竞争结合分析 | 第73-74页 |
| 4.2.6 Cry8-like蛋白的固相化 | 第74页 |
| 4.2.7 Pull-down试验 | 第74页 |
| 4.2.8 Cry8-like结合蛋白的检测 | 第74-75页 |
| 4.2.9 Cry8-like结合蛋白的LC-MS/MS鉴定 | 第75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-81页 |
| 4.3.1 Cry8-like蛋白的荧光(DyLight488)标记 | 第75页 |
| 4.3.2 DyLight488-labeled Cry8-like与大黑鳃金龟BBMV饱和结合分析 | 第75-76页 |
| 4.3.3 DyLight488-labeled Cry8-like与Cry8Ga竞争结合分析 | 第76-77页 |
| 4.3.4 Cry8-like蛋白在大黑鳃金龟中肠结合蛋白的检测 | 第77-78页 |
| 4.3.5 Cry8-like蛋白在大黑鳃金龟中肠结合蛋白的LC-MS/MS鉴定 | 第78-81页 |
| 4.4 讨论 | 第81-82页 |
| 4.5 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
