| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 体液免疫 | 第12-14页 |
| 1.1.1 抗菌肽的产生 | 第12页 |
| 1.1.2 黑化反应 | 第12-14页 |
| 1.2 细胞免疫 | 第14-15页 |
| 1.2.1 吞噬作用 | 第14页 |
| 1.2.2 集结和包囊作用 | 第14-15页 |
| 1.3 天然免疫反应发生机制 | 第15-20页 |
| 1.3.1 病原识别 | 第15-16页 |
| 1.3.2 信号调制步骤 | 第16-17页 |
| 1.3.3 信号转导步骤 | 第17-19页 |
| 1.3.4 产生效应分子 | 第19-20页 |
| 1.4 丝氨酸蛋白酶抑制剂概述 | 第20-22页 |
| 1.4.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂的分子结构及作用机理 | 第21页 |
| 1.4.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能 | 第21-22页 |
| 1.5 亚洲玉米螟概述 | 第22-23页 |
| 第二章 亚洲玉米螟体液免疫反应初步探究 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 亚洲玉米螟饲养方法 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂及培养基配方 | 第24页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 亚洲玉米螟幼虫淋巴液抑菌活性检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 亚洲玉米螟幼虫被白僵菌诱导后酚氧化酶活性测定 | 第25页 |
| 2.2.3 亚洲玉米螟抗菌肽的菌诱导表达模式鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 亚洲玉米螟幼虫总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.5 cDNA第一链合成 | 第26页 |
| 2.2.6 抗菌肽基因鉴定及分析 | 第26-27页 |
| 2.2.7 抗菌肽基因特异性引物设计 | 第27页 |
| 2.2.8 半定量PCR(RT-PCR)检测抗菌肽转录水平表达差异 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-35页 |
| 2.3.1 球孢白僵菌诱导亚洲玉米螟酚氧化酶活性增加 | 第28页 |
| 2.3.2 病原菌侵染导致亚洲玉米螟淋巴液的抗菌活性增加 | 第28-29页 |
| 2.3.3 亚洲玉米螟抗菌肽基因分析 | 第29-34页 |
| 2.3.4 抗菌肽基因OfgLys6、OfgAtt、OfgIID菌诱导表达模式鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第35-37页 |
| 2.4.1 白僵菌诱导酚氧化酶活性提高 | 第35-36页 |
| 2.4.2 亚洲玉米螟的抗菌肽基因可被病原菌诱导表达 | 第36-37页 |
| 第三章 丝氨酸蛋白酶SP1、SP13和SP105的基因克隆及序列分析 | 第37-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验所用试剂 | 第37页 |
| 3.1.2 实验所用试剂及培养基配方 | 第37-38页 |
| 3.1.3 实验所用仪器 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-46页 |
| 3.2.1 亚洲玉米螟幼虫各组织(头、肠、淋巴细胞和脂肪体)解剖 | 第38页 |
| 3.2.2 亚洲玉米螟注射菌诱导方法 | 第38页 |
| 3.2.3 亚洲玉米螟幼虫总RNA及不同组织RNA提取方法 | 第38页 |
| 3.2.4 第一链cDNA的获得 | 第38-39页 |
| 3.2.5 亚洲玉米螟13个丝氨酸蛋白酶基因序列分析 | 第39页 |
| 3.2.6 5'-Full RACE获得SP13基因5'端序列 | 第39-42页 |
| 3.2.7 各基因特异性引物的设计 | 第42-43页 |
| 3.2.8 基因扩增及RT-PCR | 第43-44页 |
| 3.2.9 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第44-45页 |
| 3.2.10 重组载体构建及克隆筛选 | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-55页 |
| 3.3.1 亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶的鉴定 | 第46页 |
| 3.3.2 13个丝氨酸蛋白酶基因的进化树分析 | 第46-48页 |
| 3.3.3 5'-Full RACE技术扩增得到SP13的5'端序列 | 第48-49页 |
| 3.3.4 SP1、SP13和SP105基因全长扩增 | 第49-50页 |
| 3.3.5 SP1、SP13和SP105氨基酸序列分析 | 第50-53页 |
| 3.3.6 SP1、SP13和SP105表达模式鉴定 | 第53-55页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第55-57页 |
| 3.4.1 SP1、SP13和SP105基因分析 | 第55-56页 |
| 3.4.2 SP1、SP13和SP105表达模式分析 | 第56-57页 |
| 第四章 丝氨酸蛋白酶SP1、SP13和SP105蛋白表达及激活 | 第57-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 实验所用试剂 | 第57页 |
| 4.1.2 实验所用试剂及培养基配方 | 第57-58页 |
| 4.1.3 实验所用仪器 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-66页 |
| 4.2.1 大肠杆菌DH10Bac感受态细胞的制作 | 第58页 |
| 4.2.2 SP1、SP13和SP105基因加酶切位点及6×His-Tag | 第58-59页 |
| 4.2.3 SP1、SP13和SP105构建蛋白表达载体 | 第59页 |
| 4.2.4 SP1、SP13和SP105基因激活位点定点突变 | 第59-61页 |
| 4.2.5 SPs野生型及其突变体杆状病毒构建及鉴定 | 第61页 |
| 4.2.6 QiaGen~(?) Plasmid Mini Kit质粒提取 | 第61-62页 |
| 4.2.7 Sf9细胞系培养 | 第62页 |
| 4.2.8 Sf9细胞瞬时转染及病毒液获得 | 第62-63页 |
| 4.2.9 Sf9细胞系蛋白表达纯化 | 第63-64页 |
| 4.2.10 蛋白免疫印记反应(western blot) | 第64-65页 |
| 4.2.11 突变体蛋白被商业化蛋白酶Factor Xa激活 | 第65页 |
| 4.2.12 幼虫淋巴液激活重组表达蛋白 | 第65页 |
| 4.2.13 丝氨酸蛋白酶活测定 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-70页 |
| 4.3.1 获得SP1、SP13和SP105真核表达所需重组杆状病毒Bacmid DNA | 第66页 |
| 4.3.2 SP1、SP13和SP105点突变及突变体重组杆状病毒Bacmid DNA构建 | 第66-67页 |
| 4.3.3 SP1、SP13和SP105及其突变体重组蛋白预表达 | 第67页 |
| 4.3.4 重组蛋白的表达纯化 | 第67-68页 |
| 4.3.5 突变体蛋白酶切鉴定及酶活测定 | 第68-70页 |
| 4.3.6 亚洲玉米螟淋巴液(OfHL)可激活proSP1、proSP13和proSP105 | 第70页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 丝氨酸蛋白酶SP1、SP13和SP105在黑化反应中的作用机制 | 第72-89页 |
| 5.1 实验材料 | 第72-74页 |
| 5.1.1 实验所用试剂 | 第72-73页 |
| 5.1.2 实验所用试剂配方 | 第73页 |
| 5.1.3 实验所用仪器 | 第73-74页 |
| 5.2 实验方法 | 第74-79页 |
| 5.2.1 亚洲玉米螟酚氧化酶原2(OfPPO2) cDNA全长序列扩增 | 第74页 |
| 5.2.2 PPO2基因加酶切位点 | 第74-75页 |
| 5.2.3 PPO2原核表达载体构建 | 第75-76页 |
| 5.2.4 PPO2蛋白表达纯化 | 第76-77页 |
| 5.2.5 PPO2兔血清抗体纯化 | 第77页 |
| 5.2.6 黑腹果蝇蛋白提取 | 第77页 |
| 5.2.7 SP1激活SP13 | 第77页 |
| 5.2.8 SP13_(Xa)和SP105_(Xa)激活OfPPO2 | 第77-78页 |
| 5.2.9 OfSPs激活DmPPO1 | 第78页 |
| 5.2.10 亚洲玉米螟幼虫淋巴液及重组蛋白PO活性测定 | 第78-79页 |
| 5.3 结果与分析 | 第79-87页 |
| 5.3.1 SP1_(Xa)可以提高亚洲玉米螟淋巴液PO活性测定 | 第79-80页 |
| 5.3.2 SP1_(Xa)可以激活proSP13,但不能激活proSP105 | 第80-81页 |
| 5.3.3 亚洲玉米螟酚氧化酶原2(OfPPO2)重组蛋白的获得 | 第81-82页 |
| 5.3.4 SP13可直接激活OfPPO2 | 第82-83页 |
| 5.3.5 SP105_(Xa)激活OfPPO2 | 第83-85页 |
| 5.3.6 OfSP13和OfSP105激活DmPPO1 | 第85-87页 |
| 5.4 本章小结与讨论 | 第87-89页 |
| 第六章 丝氨酸蛋白酶SP1、SP13和SP105在黑化反应中的调控机制 | 第89-104页 |
| 6.1 实验材料 | 第89页 |
| 6.2 实验方法 | 第89-91页 |
| 6.2.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制淋巴液IEARase活性及PO活性检测 | 第89页 |
| 6.2.2 Serpin-3与SP13、SP105形成复合物 | 第89-90页 |
| 6.2.3 Serpin-3抑制SP13、SP105蛋白酶活 | 第90页 |
| 6.2.4 Serpin-6、serpin-11与丝氨酸蛋白酶形成复合物 | 第90页 |
| 6.2.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制SP13、SP105对OfPPO2的激活 | 第90-91页 |
| 6.3 结果与分析 | 第91-102页 |
| 6.3.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂基因系统进化树分析 | 第91-92页 |
| 6.3.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制淋巴液IEARase活性 | 第92-93页 |
| 6.3.3 丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制淋巴液PO活性 | 第93页 |
| 6.3.4 SP13可被serpin-3/-6所调控 | 第93-97页 |
| 6.3.5 SP105可被serpin-3/-6所调控 | 第97-101页 |
| 6.3.6 SP1可能被serpin-6调控但不受serpin-11的调控 | 第101-102页 |
| 6.4 本章小结与讨论 | 第102-104页 |
| 第七章 结论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简介 | 第115页 |
