| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略语表 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1 人干细胞生长因子及其研究进展 | 第14-20页 |
| ·细胞因子 | 第14-15页 |
| ·人干细胞生长因子 | 第15-20页 |
| 2 人脐带间充质干细胞 | 第20-22页 |
| 3 成脂分化检测及调控基因 | 第22-23页 |
| 4 包涵体简介 | 第23-25页 |
| 5 穿膜肽(TAT)简介 | 第25页 |
| 6 研究目的 | 第25-26页 |
| 7 研究意义 | 第26-27页 |
| 8 实验技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 人干细胞生长因子-α基因的克隆、表达及其对人脐带间充质干细胞的增殖作用研究 | 第28-59页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第28-33页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-31页 |
| ·试剂配制 | 第31-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-48页 |
| ·人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的原代分离、培养与鉴定 | 第33-34页 |
| ·hUCMSCs总RNA的提取及cDNA的获得 | 第34-35页 |
| ·hSCGF-α基因的获取 | 第35-38页 |
| ·表达载体pET-28a(+)质粒的抽提 | 第38-39页 |
| ·pET-28a-SCGF重组载体的构建 | 第39-40页 |
| ·pET-28a-SCGF重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5α | 第40-41页 |
| ·转化后重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·pET-28a-SCGF重组质粒转化大肠杆菌感受态BL21(DE3) | 第41-42页 |
| ·目的蛋白rhSCGF-α诱导表达及鉴定 | 第42页 |
| ·目的蛋白rhSCGF-α高表达条件的摸索 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第43页 |
| ·rhSCGF-α蛋白纯化 | 第43-44页 |
| ·rhSCGF-α可溶性纯化 | 第44-45页 |
| ·目的蛋白脱咪唑 | 第45页 |
| ·Western blot验证纯化出的rhSCGF-α | 第45-46页 |
| ·集落形成实验鉴定rhSCGF-α生物活性 | 第46页 |
| ·rhSCGF-α对hUCMSCs的增殖作用 | 第46-48页 |
| ·hSCGF-α与标准对照品对hUCMSCs增殖作用的活性比较 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-57页 |
| ·hUCMSCs总RNA提取电泳图 | 第48-49页 |
| ·rhSCGF-α全长基因SCGF_1基因PCR结果 | 第49页 |
| ·rhSCGF-α成熟肽编码基因SCGF_2的PCR扩增 | 第49-50页 |
| ·载体质粒pET-28a(+)小抽 | 第50页 |
| ·鉴定构建的重组质粒 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白表达检测 | 第51页 |
| ·蛋白高表达条件的摸索 | 第51-53页 |
| ·表达条件优化 | 第53页 |
| ·纯化结果 | 第53-54页 |
| ·western blot验证纯化的目的蛋白 | 第54-55页 |
| ·rhSCGF-α重组蛋白活性检测 | 第55页 |
| ·hSCGF-α重组蛋白对hUCMSCs的增殖作用 | 第55-56页 |
| ·hSCGF-α与标准对照品对hUCMSCs增殖作用的活性比较 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 第三章 hSCGF-α穿膜肽的构建及其对hUCMSCs增殖作用的影响 | 第59-74页 |
| 1 实验材料 | 第59-64页 |
| ·主要试剂和酶 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| ·试剂的配制 | 第61-64页 |
| 2 实验方法 | 第64-69页 |
| ·hSCGF-α穿膜肽引物的设计 | 第64-65页 |
| ·TAT-SCGF基因的获得 | 第65-66页 |
| ·TAT-SCGF-28a重组质粒的构建 | 第66页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第66-67页 |
| ·目的蛋白TAT-SCGF表达鉴定 | 第67页 |
| ·TAT-SCGF穿膜肽表达条件的摸索 | 第67页 |
| ·TAT-SCGF穿膜肽的1L摇瓶发酵 | 第67页 |
| ·TAT-SCGF穿膜肽的包涵体纯化 | 第67-68页 |
| ·Western blot验证纯化出的TAT-SCGF | 第68-69页 |
| ·TAT-SCGF穿膜肽对hUCMSCs的增殖作用 | 第69页 |
| 3 实验结果 | 第69-72页 |
| ·TAT-SCGF PCR结果 | 第69页 |
| ·重组质粒TAT-SCGF-28a双酶切检测 | 第69-70页 |
| ·SDS-PAGE检测穿膜肽表达情况 | 第70-71页 |
| ·TAT-SCGF包涵体纯化 | 第71-72页 |
| ·Western blot验证纯化出的TAT-SCGF | 第72页 |
| ·检测TAT-SCGF重组蛋白对hUCMSCs的增殖刺激作用 | 第72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 第四章 rhSCGF-α对hUCMSCs成脂分化的影响 | 第74-83页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第74-76页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验仪器 | 第75页 |
| ·试剂配制 | 第75-76页 |
| 2 实验方法 | 第76-79页 |
| ·hUCMSCs的成脂分化及实验分组 | 第76-77页 |
| ·成脂分化蛋白的提取 | 第77页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第77-78页 |
| ·成脂分化RNA的抽提 | 第78页 |
| ·Western blot检测rhSCGF-α对hUCMSCs的成脂分化影响 | 第78-79页 |
| ·Realtime PCR检测rhSCGF-α对hUCMSCs的成脂分化影响 | 第79页 |
| 3 实验结果 | 第79-81页 |
| ·rhSCGF-α对hUCMSCs的成脂分化Western blot检测结果 | 第79-80页 |
| ·rhSCGF-α对hUCMSCs的成脂分化Realtime PCR结果 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 全文总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 在研期间发表的论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
