| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 化学农药概述 | 第14-16页 |
| 1.1 化学农药的使用现状 | 第14页 |
| 1.2 化学农药对环境的影响 | 第14-15页 |
| 1.2.1 化学农药对土壤的污染 | 第15页 |
| 1.2.2 化学农药对水体的污染 | 第15页 |
| 1.2.3 化学农药对大气的污染 | 第15页 |
| 1.3 化学农药在环境中的转化 | 第15-16页 |
| 1.3.1 化学农药的非生物转化 | 第16页 |
| 1.3.2 化学农药的生物转化 | 第16页 |
| 2 芳氧苯氧丙酸酯类除草剂概述 | 第16-18页 |
| 2.1 芳氧苯氧丙酸酯类除草剂的简介 | 第16-17页 |
| 2.2 芳氧苯氧丙酸酯类除草剂的作用机制 | 第17-18页 |
| 3 除草剂精喹禾灵概述 | 第18-19页 |
| 3.1 精喹禾灵的物化性质及作用方式 | 第18页 |
| 3.2 精喹禾灵的生态毒性 | 第18-19页 |
| 3.3 精喹禾灵的降解行为 | 第19页 |
| 4 研究现状及目的意义 | 第19-22页 |
| 第二章 精喹禾灵降解菌的分离鉴定及生理生化特征研究 | 第22-30页 |
| 1 材料方法 | 第22-25页 |
| 1.1 菌株、培养基和试剂 | 第22页 |
| 1.1.1 菌种来源 | 第22页 |
| 1.1.2 培养基 | 第22页 |
| 1.1.3 试剂 | 第22页 |
| 1.2 精喹禾灵降解菌株的分离筛选 | 第22-23页 |
| 1.3 精喹禾灵及其降解产物的检测 | 第23页 |
| 1.3.1 紫外扫描法 | 第23页 |
| 1.3.2 LC-MS法 | 第23页 |
| 1.4 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第23页 |
| 1.5 降解菌株的 16S rRNA序列的扩增及分析 | 第23-25页 |
| 1.5.1 降解菌株总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 1.5.2 菌株 16S rRNA基因的PCR扩增。 | 第24页 |
| 1.5.3 PCR产物的TA克隆 | 第24页 |
| 1.5.4 感受态细胞的制备（CaCl2法）与酶连产物的转化 | 第24-25页 |
| 1.5.5 质粒DNA的小量提取 | 第25页 |
| 1.5.6 16S rRNA序列测定 | 第25页 |
| 1.6 降解菌株系统发育地位的确定 | 第25页 |
| 2 结果与讨论 | 第25-29页 |
| 2.1 精喹禾灵降解菌株的分离与筛选 | 第25-26页 |
| 2.2 降解菌株的菌落形态及生理生化特性 | 第26-27页 |
| 2.3 降解菌株的初步鉴定 | 第27-29页 |
| 3 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 精喹禾灵降解菌株QE-9 生长特性和降解特性的研究 | 第30-38页 |
| 1 材料方法 | 第30-31页 |
| 1.1 供试菌株 | 第30页 |
| 1.2 培养基和试剂 | 第30页 |
| 1.3 种子液的制备 | 第30页 |
| 1.4 温度对菌株QE-9 生长的影响 | 第30页 |
| 1.5 初始pH对菌株QE-9 生长的影响 | 第30页 |
| 1.6 NaCl浓度对菌株QE-9 生长的影响 | 第30页 |
| 1.7 菌株QE-9 对抗生素的耐受性 | 第30页 |
| 1.8 碳源对菌株QE-9 生长的影响 | 第30-31页 |
| 1.9 氮源对菌株QE-9 生长的影响 | 第31页 |
| 1.10 温度、pH、底物浓度，接种量对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第31页 |
| 1.11 降解率的测定 | 第31页 |
| 2 结果与讨论 | 第31-37页 |
| 2.1 环境条件对QE-9 生长的影响 | 第31-34页 |
| 2.1.1 不同碳源对菌株QE-9 生长的影响 | 第31-32页 |
| 2.1.2 不同氮源对菌株QE-9 生长的影响 | 第32页 |
| 2.1.3 温度对菌株QE-9 生长的影响 | 第32-33页 |
| 2.1.4 pH对菌株QE-9 生长的影响 | 第33页 |
| 2.1.5 NaCl浓度对菌株QE-9 生长的影响 | 第33-34页 |
| 2.2 环境条件对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第34-37页 |
| 2.2.1 温度对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第34页 |
| 2.2.2 初始pH对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.3 农药初始浓度对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.4 接种量对菌株QE-9 降解精喹禾灵的影响 | 第36-37页 |
| 3 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 精喹禾灵降解关键酶基因的克隆与表达 | 第38-60页 |
| 第一节 精喹禾灵降解关键酶基因的克隆 | 第38-47页 |
| 1 材料方法 | 第38-40页 |
| 1.1 培养基和试剂 | 第38页 |
| 1.1.1 培养基 | 第38页 |
| 1.1.2 试剂 | 第38页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第38页 |
| 1.2.1 菌株 | 第38页 |
| 1.2.2 质粒 | 第38页 |
| 1.3 菌株QE-9 总DNA的提取 | 第38页 |
| 1.4 质粒DNA的小量提取 | 第38页 |
| 1.5 超级感受态的制备 | 第38-39页 |
| 1.6 染色体总DNA的Sau3AI部分酶切与酶切片段回收 | 第39页 |
| 1.7 酶连 | 第39页 |
| 1.8 转化和阳性克隆子的筛选 | 第39-40页 |
| 1.9 基因序列的测定和分析 | 第40页 |
| 2 结果与讨论 | 第40-45页 |
| 2.1 菌株QE-9 基因组DNA的部分酶切 | 第40-41页 |
| 2.2 菌株QE-9 总DNA文库的构建及阳性克隆子的筛选 | 第41-42页 |
| 2.3 阳性克隆子的序列测定及分析 | 第42-43页 |
| 2.4 降解关键酶EstQE氨基酸序列分析和分类 | 第43-45页 |
| 3 小结 | 第45-47页 |
| 第二节 精喹禾灵酯酶基因estqe的表达 | 第47-54页 |
| 1 材料方法 | 第47-50页 |
| 1.1 培养基和试剂 | 第47页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第47页 |
| 1.3 E. coli BL21（DE3）普通感受态细胞的制备（CaCl2法） | 第47页 |
| 1.4 精喹禾灵酯酶基因estqe的扩增 | 第47页 |
| 1.5 PCR产物和载体pET-29a双酶切 | 第47-48页 |
| 1.6 酶连及酶连产物的转化 | 第48页 |
| 1.7 精喹禾灵酯酶EstQE的诱导表达 | 第48页 |
| 1.8 酯酶EstQE的Ni2+亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| 1.8.1 样品处理 | 第48页 |
| 1.8.2 缓冲液配方 | 第48-49页 |
| 1.8.3 蛋白纯化步骤 | 第49页 |
| 1.9 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第49-50页 |
| 1.9.1 样品制备 | 第49页 |
| 1.9.2 聚丙烯酰胺凝胶的灌制 | 第49-50页 |
| 1.9.3 上样和电泳 | 第50页 |
| 1.9.4 染色与脱色 | 第50页 |
| 2 结果与讨论 | 第50-53页 |
| 2.1 酯酶基因estqe的扩增及重组表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.2 酯酶EstQE在E.coli BL21中表达产物的纯化和SDS-PAGE分析 | 第51页 |
| 2.3 酯酶EstQE降解精喹禾灵产物的LC-MS鉴定 | 第51-53页 |
| 3 小结 | 第53-54页 |
| 第三节 酯酶EstQE酶学特性的研究 | 第54-60页 |
| 1 材料方法 | 第54-55页 |
| 1.1 材料 | 第54页 |
| 1.2 重组蛋白酶液的制备和纯化 | 第54页 |
| 1.3 蛋白浓度的测定 | 第54页 |
| 1.4 酯酶EstQE的酶活力测定 | 第54页 |
| 1.5 酶的热稳定性与最适反应温度的测定 | 第54页 |
| 1.6 酶的酸碱稳定性及最适pH的测定 | 第54-55页 |
| 1.7 金属离子对酶活性的影响 | 第55页 |
| 1.8 表面活性剂和酶抑制剂对酶活性的影响 | 第55页 |
| 1.9 酶对底物的特异性 | 第55页 |
| 1.10 酶的动力学参数测定 | 第55页 |
| 2 结果与讨论 | 第55-59页 |
| 2.1 酶的热稳定性与最适反应温度 | 第55-56页 |
| 2.2 酶的酸碱稳定性及最适pH | 第56页 |
| 2.3 金属离子对酶活性的影响 | 第56-57页 |
| 2.4 化学试剂对酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 2.5 酶的动力学参数及底物特异性研究 | 第58-59页 |
| 3 小结 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-64页 |
| 主要创新点 | 第64-66页 |
| 下一步工作设想 | 第66-68页 |
| 附录 | 第68-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
