| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白简介 | 第11-22页 |
| 1.1.1 单亚基钠离子(或单价阳离子)/氢离子逆向转运蛋白 | 第11-19页 |
| 1.1.2 多亚基Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第19-22页 |
| 1.2 盐单胞菌简介 | 第22-25页 |
| 1.2.1 盐单胞菌的定义及分类 | 第22-23页 |
| 1.2.2 盐单胞菌的生理特点 | 第23-24页 |
| 1.2.3 中度嗜盐菌Na~+/H~+逆向转运蛋白研究简介 | 第24-25页 |
| 1.3 本论文研究思路及研究意义 | 第25-26页 |
| 第二章 Halomonas sp.19-A中相关逆向转运蛋白基因的克隆 | 第26-46页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第26-34页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 培养基和缓冲液 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器及生化试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 E.coli KNabc感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第28-32页 |
| 2.1.6 逆向转运蛋白基因片段的克隆 | 第32-34页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第34-44页 |
| 2.2.1 Halomonas sp.19-A中Na~+/H~+逆向转运蛋白分析 | 第34-41页 |
| 2.2.2 重组菌株E.coli KNabc/pEASYBlunt-nhaD1、E.coliKNabc/pEASYBlunt-nhaD2、E.coli KNabc/pEASYBlunt-nhaP、E.coliKNabc/pEASYBlunt-mrp及control菌株的构建及验证 | 第41-44页 |
| 2.3 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 Halomonas sp.19-A相关逆向转运蛋白基因生长功能验证 | 第46-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第46-47页 |
| 3.1.2 培养基和缓冲液 | 第47页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 3.2.1 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp对Na~+的耐受性分析 | 第48页 |
| 3.2.2 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp对Li~+的耐受性分析 | 第48页 |
| 3.2.3 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp在LB+0.2 M Na~+培养基中的耐碱性分析 | 第48-49页 |
| 3.2.4 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp在有Li~+条件下的耐碱性分析 | 第49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-54页 |
| 3.3.1 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp对Na~+的耐受性分析 | 第49-51页 |
| 3.3.2 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp对Li~+的耐受性分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp在LB+0.2 M Na~+培养基中的耐碱性分析 | 第52-53页 |
| 3.3.4 转运蛋白NhaD1、NhaD2、NhaP及Mrp在有Li~+条件下的耐碱性分析 | 第53-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 反转膜的制备与逆向转运功能研究 | 第55-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-57页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 4.1.2 培养基 | 第56页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 4.1.4 反转膜制备所需试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.5 Na~+(K~+ or Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性测定所需试剂 | 第57页 |
| 4.1.6 蛋白质浓度测定所需试剂 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 反转膜的制备 | 第57-58页 |
| 4.2.2 反转膜中逆向转运蛋白Na~+(K~+)(Li~+)转运活性的鉴定 | 第58-60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-62页 |
| 4.3.1 反转膜中逆向转运蛋白Na~+转运活性的鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.2 反转膜中逆向转运蛋白Li~+转运活性的鉴定 | 第61页 |
| 4.3.3 反转膜中逆向转运蛋白K~+转运活性的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第五章 转录水平分析各转运蛋白表达差异 | 第64-77页 |
| 5.1 实验材料 | 第64-66页 |
| 5.1.1 菌株和引物 | 第64-65页 |
| 5.1.2 培养基 | 第65页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第65-66页 |
| 5.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 5.2.1 Halomonas sp.19-A生长曲线的绘制 | 第66页 |
| 5.2.2 菌株Halomonas sp.19-A中总RNA的提取 | 第66-67页 |
| 5.2.3 检测RNA质量 | 第67-68页 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR | 第68-70页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第70-75页 |
| 5.3.1 绘制生长曲线 | 第70-71页 |
| 5.3.2 RNA质量检测 | 第71-72页 |
| 5.3.3 引物二聚体的鉴定 | 第72-73页 |
| 5.3.4 实时荧光定量PCR | 第73-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 发表论文 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 学位论文评巧及答辩情况表 | 第88页 |
