| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 英汉缩略名词对照表 | 第16-18页 |
| 1 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 问题的提出 | 第18-19页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第19-24页 |
| 1.2.1 癌干细胞学说 | 第19页 |
| 1.2.2 癌干细胞的分选及相关研究 | 第19-20页 |
| 1.2.3 癌细胞生物力学特性与恶性程度的关系 | 第20-21页 |
| 1.2.4 盐霉素在癌干细胞治疗中的研究 | 第21-22页 |
| 1.2.5 剪切应力对细胞转移/分化的影响 | 第22-24页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第24页 |
| 1.4 本文研究主要内容和技术路线 | 第24-28页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第24-26页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第26-28页 |
| 2 肝癌干细胞(LCSCs)的富集和鉴定 | 第28-42页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验细胞 | 第29页 |
| 2.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要实验药品与试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.4 主要实验试剂的配制 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.3.1 微球体培养法富集肝癌干细胞样细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.2 流式细胞术检测癌干细胞样标志物CD133, CD90, Oct3/4 | 第32-33页 |
| 2.3.3 体外克隆形成实验检测LCSCs的增殖能力 | 第33页 |
| 2.3.4 MTT检测LCSCs对顺铂、5-FU的药物敏感性 | 第33-34页 |
| 2.3.5 ELISA检测顺铂、5-FU对LCSCs作用后LDH的释放 | 第34页 |
| 2.3.6 裸鼠体内致瘤实验 | 第34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-39页 |
| 2.4.1 MHCC97H可以形成具有自我更新能力的肿瘤球体 | 第34-35页 |
| 2.4.2 球体细胞具有较强的耐药性 | 第35-37页 |
| 2.4.3 球体细胞的癌干细胞标志物表达 | 第37-38页 |
| 2.4.4 球体细胞克隆形成能力强于MHCC97H细胞 | 第38页 |
| 2.4.5 球体细胞具有较高的体内成瘤能力 | 第38-39页 |
| 2.5 分析讨论 | 第39-40页 |
| 2.6 本章小结 | 第40-42页 |
| 3 肝癌干细胞(LCSCs)生物力学特质分析 | 第42-56页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第43页 |
| 3.2.3 主要实验药品与试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.4 主要实验试剂的配制 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.3.1 Transwell迁移实验 | 第45-46页 |
| 3.3.2 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin | 第46页 |
| 3.3.3 Western blot检测细胞F-actin的表达 | 第46-48页 |
| 3.3.4 原子力显微镜（AFM）测量细胞杨氏模量 | 第48-50页 |
| 3.4 实验结果 | 第50-53页 |
| 3.4.1 LCSCs与MHCC97H迁移能力的比较 | 第50-51页 |
| 3.4.2 LCSCs与MHCC97H细胞骨架蛋白F-actin的比较 | 第51-52页 |
| 3.4.3 LCSCs与MHCC97H细胞硬度的比较 | 第52-53页 |
| 3.5 分析讨论 | 第53-54页 |
| 3.6 本章小结 | 第54-56页 |
| 4 剪切应力对LCSCs迁移行为的影响及分子机理 | 第56-72页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第57页 |
| 4.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第57页 |
| 4.2.3 主要实验药品与试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.4 主要实验试剂的配制 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 剪切应力加载装置 | 第58页 |
| 4.3.2 剪切应力加载实验 | 第58页 |
| 4.3.3 Transwell迁移实验 | 第58-59页 |
| 4.3.4 LCSCs细胞增殖分析 | 第59页 |
| 4.3.5 Western blot检测蛋白表达 | 第59页 |
| 4.3.6 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin | 第59-60页 |
| 4.3.7 原子力显微镜（AFM）测量细胞杨氏模量 | 第60页 |
| 4.4 实验结果 | 第60-68页 |
| 4.4.1 流体剪切应力对LCSCs迁移能力的影响 | 第60页 |
| 4.4.2 流体剪切应力对LCSCs增殖能力的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.3 FAK/ERK1/2 信号蛋白介导剪切应力促进LCSCs的迁移 | 第61-64页 |
| 4.4.4 β-catenin蛋白介导剪切应力促进LCSCs的迁移 | 第64页 |
| 4.4.5 FAK/ERK1/2 与 β-catenin蛋白之间的关系 | 第64-65页 |
| 4.4.6 剪切应力通过FAK/ERK1/2/β-catenin信号通路促进LCSCs的迁移能力 | 第65页 |
| 4.4.7 剪切应力对LCSCs F-actin的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.8 剪切应力对LCSCs杨氏模量的影响 | 第66-68页 |
| 4.5 分析讨论 | 第68-70页 |
| 4.5.1 剪切应力对LCSCs增殖的影响 | 第68页 |
| 4.5.2 剪切应力影响LCSCs的迁移能力 | 第68-69页 |
| 4.5.3 FAK/ERK1/2/β-catenin信号蛋白介导剪切应力促进LCSCs迁移 | 第69-70页 |
| 4.5.4 剪切应力影响的细胞硬度与细胞骨架重排的关系 | 第70页 |
| 4.6 本章小结 | 第70-72页 |
| 5 剪切应力诱导LCSCs分化及分子机理 | 第72-84页 |
| 5.1 引言 | 第72-73页 |
| 5.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第73页 |
| 5.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第73页 |
| 5.2.3 主要实验药品与试剂 | 第73-74页 |
| 5.2.4 主要实验试剂的配制 | 第74页 |
| 5.3 实验方法 | 第74-75页 |
| 5.3.1 剪切应力加载实验 | 第74页 |
| 5.3.2 流式细胞术检测LCSCs CD133, CD90, Oct3/4 表型变化 | 第74页 |
| 5.3.3 球体形成实验 | 第74页 |
| 5.3.4 药物敏感实验 | 第74页 |
| 5.3.5 Western blot检测蛋白表达 | 第74-75页 |
| 5.3.6 原子力显微镜（AFM）测量细胞杨氏模量 | 第75页 |
| 5.3.7 裸鼠致瘤实验 | 第75页 |
| 5.4 实验结果 | 第75-80页 |
| 5.4.1 剪切应力可以使LCSCs CD133, CD90, Oct3/4 变化 | 第75-76页 |
| 5.4.2 剪切应力对LCSCs中 β-catenin表达的影响 | 第76-77页 |
| 5.4.3 剪切应力对LCSCs球体形成能力的影响 | 第77页 |
| 5.4.4 剪切应力对细胞硬度变化的影响 | 第77-78页 |
| 5.4.5 剪切应力对LCSCs药物敏感性的影响 | 第78-80页 |
| 5.4.6 裸鼠体内致瘤实验 | 第80页 |
| 5.5 分析讨论 | 第80-82页 |
| 5.5.1 剪切应力可以使LCSCs发生分化现象 | 第80页 |
| 5.5.2 剪切应力对LCSCs中 β-catenin表达的影响 | 第80-81页 |
| 5.5.3 剪切应力影响LCSCs细胞硬度与细胞分化的关系 | 第81-82页 |
| 5.6 本章小结 | 第82-84页 |
| 6 盐霉素对LCSCs运动能力的影响及分子机理 | 第84-100页 |
| 6.1 引言 | 第84页 |
| 6.2 实验材料 | 第84-87页 |
| 6.2.1 实验细胞 | 第84页 |
| 6.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第84-85页 |
| 6.2.3 主要实验药品与试剂 | 第85-86页 |
| 6.2.4 主要实验试剂的配制 | 第86-87页 |
| 6.3 实验方法 | 第87-90页 |
| 6.3.1 MTT测定细胞增殖能力 | 第87页 |
| 6.3.2 Transwell测定细胞迁移/侵袭 | 第87-88页 |
| 6.3.3 Western blot检测蛋白表达 | 第88页 |
| 6.3.4 明胶酶谱检测MMPs分泌 | 第88-90页 |
| 6.3.5 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin | 第90页 |
| 6.3.6 原子力显微镜（AFM）测量细胞杨氏模量 | 第90页 |
| 6.4 实验结果 | 第90-96页 |
| 6.4.1 盐霉素对LCSCs增殖的影响 | 第90-91页 |
| 6.4.2 盐霉素对LCSCs运动能力的影响 | 第91页 |
| 6.4.3 盐霉素对LCSCs FAK-ERK1/2 信号通路的影响 | 第91-92页 |
| 6.4.4 盐霉素对LCSCs MMP-2, MMP-9 表达的影响 | 第92-93页 |
| 6.4.5 盐霉素通过FAK-ERK1/2 信号通路抑制LCSCs的运动能力 | 第93-94页 |
| 6.4.6 盐霉素对LCSCsF-actin的影响 | 第94-95页 |
| 6.4.7 盐霉素对LCSCs杨氏模量的影响 | 第95-96页 |
| 6.5 分析讨论 | 第96-98页 |
| 6.5.1 FAK-ERK1/2 信号通路在Sal影响的细胞迁移及侵袭中的作用 | 第96-97页 |
| 6.5.2 MMP-2, MMP-9 在盐霉素抑制LCSCs侵袭中的作用 | 第97页 |
| 6.5.3 盐霉素影响的细胞硬度与细胞骨架重排的关系 | 第97-98页 |
| 6.6 本章小结 | 第98-100页 |
| 7 盐霉素对LCSCs分化行为的影响及分子机制 | 第100-112页 |
| 7.1 引言 | 第100-101页 |
| 7.2 实验材料 | 第101-102页 |
| 7.2.1 实验细胞 | 第101页 |
| 7.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第101页 |
| 7.2.3 主要实验药品与试剂 | 第101页 |
| 7.2.4 主要实验试剂的配制 | 第101-102页 |
| 7.3 实验方法 | 第102-103页 |
| 7.3.1 流式细胞术检测LCSCs CD133, CD90, Oct3/4 表型变化 | 第102页 |
| 7.3.2 球体形成实验 | 第102页 |
| 7.3.3 药物敏感实验 | 第102页 |
| 7.3.4 Western blot检测蛋白表达 | 第102页 |
| 7.3.5 原子力显微镜（AFM）测量细胞杨氏模量 | 第102-103页 |
| 7.3.6 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin | 第103页 |
| 7.3.7 裸鼠致瘤实验 | 第103页 |
| 7.4 实验结果 | 第103-108页 |
| 7.4.1 盐霉素对LCSCs球体形成能力的影响 | 第103-104页 |
| 7.4.2 盐霉素对LCSCs药物敏感性的影响 | 第104-105页 |
| 7.4.3 盐霉素通过Wnt/β-catenin信号通路促进LCSCs分化 | 第105页 |
| 7.4.4 盐霉素对LCSCs癌干细胞标志物CD133,CD90, Oct3/4 的影响 | 第105-106页 |
| 7.4.5 盐霉素对LCSCs杨氏模量的影响 | 第106-107页 |
| 7.4.6 盐霉素对LCSCs体内致瘤能力的影响 | 第107-108页 |
| 7.5 分析讨论 | 第108-110页 |
| 7.5.1 盐霉素影响LCSCs的分化能力 | 第108-109页 |
| 7.5.2 盐霉素影响LCSCs细胞硬度与细胞分化的关系 | 第109-110页 |
| 7.5.3 β-catenin介导盐霉素促进LCSCs的分化 | 第110页 |
| 7.6 本章小结 | 第110-112页 |
| 8 全文总结与展望 | 第112-114页 |
| 8.1 主要结论 | 第112页 |
| 8.2 后续工作进展 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-130页 |
| 附录 | 第130页 |
| A. 作者攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第130页 |
| B. 作者攻读博士学位期间的论文 | 第130页 |
| C. 作者攻读博士学位期间发表专利目录 | 第130页 |
