| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-20页 |
| 第一章 IFNα的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1 干扰素简介 | 第11页 |
| 1.2 干扰素分类 | 第11页 |
| 1.3 IFN-α的结构和产生 | 第11-12页 |
| 1.4 IFN-α的受体 | 第12页 |
| 1.5 IFN-α的信号传导 | 第12-13页 |
| 1.6 动物干扰素的研究进展 | 第13页 |
| 1.7 CaIFNα的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.8 犬α干扰素基因工程表达研究进展 | 第14页 |
| 1.9 未来与展望 | 第14-15页 |
| 第二章 毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第15-20页 |
| 2.1 毕赤酵母表达系统简介 | 第15页 |
| 2.2 毕赤酵母的开发历程 | 第15页 |
| 2.3 毕赤酵母菌启动子及其代谢 | 第15-16页 |
| 2.4 毕次酵母菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.5 外源基因的整合转化和筛选 | 第16-17页 |
| 2.6 信号肽对目的蛋白表达的影响 | 第17-18页 |
| 2.7 发酵过程优化 | 第18-19页 |
| 2.8 未来和展望 | 第19-20页 |
| 第二篇 研究内容 | 第20-59页 |
| 第一章 工程菌株的鉴定及摇瓶培养条件优化 | 第20-40页 |
| 1.1 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1.1 仪器 | 第20页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.1.3 溶液与培养基的配制 | 第21-22页 |
| 1.1.4 菌种 | 第22页 |
| 1.1.5 引物设计 | 第22-23页 |
| 1.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 1.2.1 工程菌株的鉴定 | 第23-24页 |
| 1.2.2 工程菌生长条件优化 | 第24-25页 |
| 1.2.3 工程菌诱导条件的优化 | 第25-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-38页 |
| 1.3.1 工程菌株的鉴定 | 第28-30页 |
| 1.3.2 工程菌生长条件的优化 | 第30-34页 |
| 1.3.3 工程菌株摇瓶培养诱导表达条件的优化 | 第34-38页 |
| 1.4 讨论 | 第38-39页 |
| 1.5 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 工程菌发酵中试研究 | 第40-47页 |
| 2.1 材料 | 第40页 |
| 2.1.1 菌种 | 第40页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 2.1.3 试剂 | 第40页 |
| 2.1.4 培养基 | 第40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 2.2.1 变色酸分光光度法测定发酵液中的甲醇含量 | 第40-41页 |
| 2.2.2 发酵过程中溶氧和pH检测 | 第41页 |
| 2.2.3 工程菌大规模发酵实验 | 第41-42页 |
| 2.2.4 发酵过程中pH的优化 | 第42页 |
| 2.2.5 以优化后条件对工程菌发酵 | 第42页 |
| 2.3 结果 | 第42-45页 |
| 2.3.1 甲醇含量标准曲线测定 | 第42-43页 |
| 2.3.2 发酵过程中菌的生长曲线 | 第43页 |
| 2.3.3 发酵过程中溶氧随时间变化图 | 第43-44页 |
| 2.3.4 发酵过程中甲醇浓度的检测 | 第44页 |
| 2.3.5 发酵诱导时间和发酵诱导pH对目的蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.6 以优化后的条件对目的蛋白发酵 | 第45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 犬α干扰素蛋白纯化及Western-blot检测 | 第47-54页 |
| 3.1 材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第47页 |
| 3.1.2 试剂 | 第47-48页 |
| 3.2 方法 | 第48-49页 |
| 3.2.1 目的蛋白纯化 | 第48页 |
| 3.2.2 Western-blot鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-52页 |
| 3.3.1 摇瓶培养目的蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 发酵后目的蛋白纯化 | 第50-52页 |
| 3.3.3 Western-blot鉴定 | 第52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第四篇 犬α干扰素的活性检测 | 第54-59页 |
| 4.1 材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第54页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第54页 |
| 4.1.3 主要试剂和溶液 | 第54-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 重组CaIFN-α生物活性的测定 | 第55-56页 |
| 4.2.2 犬α干扰素抗病毒作用研究 | 第56页 |
| 4.2.3 犬α干扰素在非同源细胞上的抗病毒活性 | 第56页 |
| 4.3 结果 | 第56-58页 |
| 4.3.1 VSV病毒在MDCK细胞上的效价检测 | 第56-57页 |
| 4.3.2 测定摇瓶培养纯化后目的蛋白的活性 | 第57页 |
| 4.3.3 犬α干扰素抗病毒活性检测 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
