| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 蜱类抗凝血酶概述 | 第9页 |
| 1.2 蜱类抗凝血酶基因的克隆和天然蛋白的分离纯化 | 第9-13页 |
| 1.2.1 抗凝血酶基因的克隆 | 第10-12页 |
| 1.2.2 抗凝血酶天然蛋白的分离纯化 | 第12-13页 |
| 1.3 蜱类抗凝血酶蛋白的体外表达和纯化 | 第13页 |
| 1.4 蜱类抗凝血酶功能活性测定 | 第13-15页 |
| 1.4.1 蜱类抗凝血酶的抗凝血功能活性检测 | 第13-14页 |
| 1.4.2 对丝氨酸蛋白酶抑制作用的检测 | 第14页 |
| 1.4.3 蜱类抗凝血酶的其他功能 | 第14-15页 |
| 1.5 蜱类抗凝血酶药物 | 第15页 |
| 1.6 展望 | 第15-16页 |
| 第二章 构建森林革蜱cDNA文库 | 第16-21页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 材料与方法 | 第16-19页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第16-17页 |
| 2.2.3 cDNA文库构建 | 第17-19页 |
| 2.2.4 连接转化 | 第19页 |
| 2.2.5 库容量测定 | 第19页 |
| 2.3 结果 | 第19-20页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.3.2 库容量测定 | 第20页 |
| 2.4 讨论 | 第20-21页 |
| 第三章 森林革蜱抗凝血酶基因的克隆 | 第21-43页 |
| 3.1 引言 | 第21页 |
| 3.2 材料与方法 | 第21-26页 |
| 3.2.1 森林革蜱抗凝血酶基因的筛选 | 第21-24页 |
| 3.2.2 抗凝血酶基因在森林革蜱各组织和发育期各阶段表达量研究. 16 | 第24-26页 |
| 3.3 结果 | 第26-42页 |
| 3.3.1 抗凝血酶基因片段PCR结果（RACE） | 第26-27页 |
| 3.3.2 抗凝血酶扩增全长PCR结果 | 第27-28页 |
| 3.3.3 菌落PCR电泳 | 第28-29页 |
| 3.3.4 氨基酸序列分析 | 第29-31页 |
| 3.3.5 抗凝血酶蛋白理化参数在线检索 | 第31-35页 |
| 3.3.6 实时荧光定量PCR | 第35-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 森林革蜱抗凝血酶基因的表达和功能分析 | 第43-59页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 材料与方法 | 第43-49页 |
| 4.2.1 森林革蜱抗凝血酶基因DS-AT原核表达载体的构建 | 第43-47页 |
| 4.2.2 森林革蜱抗凝血酶基因DS-AT的原核表达和纯化 | 第47页 |
| 4.2.3 DS-AT原核表达条件优化 | 第47页 |
| 4.2.4 菌液处理 | 第47页 |
| 4.2.5 SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 4.2.6 重组蛋白DS-AT的纯化 | 第48-49页 |
| 4.3 森林革蜱重组蛋白DS-AT功能检测 | 第49-51页 |
| 4.3.1 纤维蛋白原凝血实验（Fibrinogen-clotting assy） | 第49-50页 |
| 4.3.2 复钙时间测定 | 第50页 |
| 4.3.3 重组蛋白DS-AT抑菌活性分析 | 第50-51页 |
| 4.4 结果 | 第51-57页 |
| 4.4.1 DS-AT的原核表达 | 第51-55页 |
| 4.4.2 重组蛋白DS-AT纤维蛋白原凝血实验 | 第55-56页 |
| 4.4.3 重组蛋白DS-AT复钙时间测定 | 第56页 |
| 4.4.4 重组蛋白DS-AT的抑菌活性测定 | 第56-57页 |
| 4.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第65页 |
