| 英文缩写说明 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 微流控生物催化 | 第18-20页 |
| 1.1.1 微反应器的特点 | 第18-19页 |
| 1.1.2 催化剂在微流控生物催化中的应用 | 第19页 |
| 1.1.3 离子液体在生物催化体系中的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 细胞表面展示技术 | 第20-22页 |
| 1.2.1 酿酒酵母细胞表面展示系统 | 第20-21页 |
| 1.2.2 细胞表面展示技术的应用 | 第21-22页 |
| 1.3 RHA的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.1 RHA的基因型 | 第22页 |
| 1.3.2 RHA的来源 | 第22-23页 |
| 1.3.3 传统RHA的制备 | 第23-24页 |
| 1.4 生物催化合成异槲皮苷 | 第24-25页 |
| 1.4.1 传统酶法合成异槲皮苷 | 第24-25页 |
| 1.4.2 微型生物催化合成异槲皮苷 | 第25页 |
| 1.5 研究目的与主要内容 | 第25-28页 |
| 1.5.1 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 研究内容与技术路线 | 第26-28页 |
| 第2章 密码子优化coRhaA在酿酒酵母细胞的表面展示研究 | 第28-40页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.3.1 密码子优化 | 第31页 |
| 2.3.2 载体的构建及转化酿酒酵母 | 第31页 |
| 2.3.3 coRhaA在酿酒酵母S.cerevisiae中的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.3.4 全细胞催化剂coRhaA的制备 | 第32页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE和Western-blot检测 | 第32页 |
| 2.3.6 免疫荧光检测 | 第32页 |
| 2.3.7 全细胞催化剂coRhaA的酶活力测定 | 第32-33页 |
| 2.3.8 最适温度及p H | 第33页 |
| 2.3.9 统计分析 | 第33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 密码子优化分析 | 第33-34页 |
| 2.4.2 表面展示载体pYD1-corhaA的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.3 coRhaA表达的检测 | 第35-36页 |
| 2.4.4 RhaA和coRhaA的表达 | 第36-37页 |
| 2.4.5 全细胞催化剂coRhaA的诱导时间 | 第37-38页 |
| 2.4.6 coRhaA酶学性质分析 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 新型RhaB1的异源表达及酶学性质研究 | 第40-54页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第41-43页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.3.1 构建含rha B1的重组菌株 | 第43-44页 |
| 3.3.2 诱导RhaB1表达 | 第44页 |
| 3.3.3 重组RhaB1的制备及分离纯化 | 第44-45页 |
| 3.3.4 重组RhaB1的分析鉴定 | 第45页 |
| 3.3.5 RhaB1的活性检测 | 第45页 |
| 3.3.6 RhaB1生物催化水解pNPR | 第45-47页 |
| 3.3.7 RhaB1酶促水解pNPR的反应动力学 | 第47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 3.4.1 重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 重组RhaB1的分析检测及制备 | 第48页 |
| 3.4.3 质谱法分析RhaB1 | 第48-49页 |
| 3.4.4 RhaB1的活性检测 | 第49页 |
| 3.4.5 RhaB1生物催化水解pNPR | 第49-51页 |
| 3.4.6 RhaB1酶促水解pNPR的反应动力学 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第4章 coRhaA和RhaB1催化芦丁水解合成异槲皮苷 | 第54-64页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验试剂与仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第55页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.3.1 HPLC法分析芦丁、异槲皮苷和槲皮素 | 第55页 |
| 4.3.2 LC-MS法分析芦丁和异槲皮苷 | 第55-56页 |
| 4.3.3 芦丁和异槲皮苷的标准曲线 | 第56页 |
| 4.3.4 pH及温度对coRhaA水解芦丁的影响 | 第56页 |
| 4.3.5 温度及pH对RhaB1合成异槲皮苷的影响 | 第56-57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-63页 |
| 4.4.1 HPLC分析法芦丁、异槲皮苷和槲皮素 | 第57-58页 |
| 4.4.2 LC-MS法分析芦丁和异槲皮苷 | 第58-59页 |
| 4.4.3 芦丁和异槲皮苷的标准曲线 | 第59-60页 |
| 4.4.4 pH及温度对coRhaA催化水解芦丁的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.5 温度及pH对RhaB1合成异槲皮苷的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.6 coRhaA和RhaB1的对比分析 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 重组RhaB1微流控催化合成异槲皮苷 | 第64-74页 |
| 5.1 引言 | 第64-65页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第65-66页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第65页 |
| 5.2.2 试验试剂 | 第65页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第65-66页 |
| 5.3 试验方法 | 第66-67页 |
| 5.3.1 微通道反应器中温度和流速对合成异槲皮苷的影响 | 第66页 |
| 5.3.2 微通道反应器中离子液体对合成异槲皮苷的影响 | 第66页 |
| 5.3.3 不同反应器中酶促合成异槲皮苷的动力学研究 | 第66-67页 |
| 5.3.4 CD分析 | 第67页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第67-72页 |
| 5.4.1 微通道反应器中温度和流速对合成异槲皮苷的影响 | 第67-69页 |
| 5.4.2 微通道反应器中离子液体对合成异槲皮苷的影响 | 第69-70页 |
| 5.4.3 不同反应器中酶促合成异槲皮苷的动力学研究 | 第70-71页 |
| 5.4.4 CD法分析[Toma][Tf_2N]对RhaB1结构的影响 | 第71-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 附件 1：corhaA的核苷酸序列 | 第88-90页 |
| 附件 2：RhaB1部分氨基酸序列质谱图 | 第90-93页 |
