| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词 | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 焦磷酸硫胺素酶的概述 | 第11-12页 |
| 1.2 乙酰乳酸合酶 | 第12-19页 |
| 1.2.1 乙酰乳酸合酶简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 乙酰乳酸合酶的晶体结构 | 第13-17页 |
| 1.2.3 乙酰乳酸合酶的催化机制 | 第17-18页 |
| 1.2.4 乙酰乳酸合酶抑制剂的研究 | 第18-19页 |
| 1.3 1-脱氧D-木酮糖5-磷酸合酶 | 第19-24页 |
| 1.3.1 萜类化合物生物合成途径 | 第19-21页 |
| 1.3.2 1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶简介 | 第21页 |
| 1.3.3 1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶的晶体结构 | 第21-24页 |
| 1.4 海栖热袍菌简介 | 第24页 |
| 1.5 本课题研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 海栖热袍菌乙酰乳酸合酶的表达与纯化 | 第25-40页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-30页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 所需试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要溶液配方 | 第27-30页 |
| 2.1.5 所需仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 获取TmAHAS催化亚基基因 | 第30-31页 |
| 2.2.2 克隆载体pMD18T-TmAHAS的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.3 表达载体pET28-TmAHAS的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.5 重组菌的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.2.7 重组蛋白的western blot | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 2.3.1 pET28a-TmAHAS表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.2 Tm-AHAS的表达与纯化结果 | 第37-38页 |
| 2.3.3 Tm-AHAS Western blot结果 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 海栖热袍菌乙酰乳酸合酶反应条件及参数测定 | 第40-53页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第40-41页 |
| 3.1.1 材料 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂配方 | 第40-41页 |
| 3.1.3 仪器 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 Tm-AHAS的浓度测定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 Tm-AHAS的活性测定 | 第42页 |
| 3.2.3 Tm-AHAS最适反应条件的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.4 Tm-AHAS的稳定性研究 | 第43页 |
| 3.2.5 Tm-AHAS动力学参数的测定 | 第43页 |
| 3.2.6 Tm-AHAS催化丙酮酸与苯甲醛反应 | 第43-45页 |
| 3.2.7 抑制剂对AHAS活性的影响 | 第45页 |
| 3.2.8 AHASs的序列比对 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-52页 |
| 3.3.1 Tm-AHAS的浓度及活性检测结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2 Tm-AHAS最适反应条件优化结果 | 第46-48页 |
| 3.3.3 Tm-AHAS的稳定性 | 第48页 |
| 3.3.4 Tm-AHAS动力学参数的测定结果 | 第48-49页 |
| 3.3.5 Tm-AHAS催化丙酮酸与苯甲醛反应结果 | 第49-51页 |
| 3.3.6 抑制剂对Tm-AHAS的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.7 AHASs的序列比对结果 | 第52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 海栖热袍菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶的研究 | 第53-63页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.1.2 PCR引物设计 | 第53页 |
| 4.1.3 主要试剂配方 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 克隆载体pMD18T-TmDXS的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 表达载体pET28a-TmDXS的构建 | 第54页 |
| 4.2.3 重组菌的诱导表达 | 第54页 |
| 4.2.4 重组蛋白的分离纯化 | 第54-55页 |
| 4.2.5 Tm-DXS的柱上复性法 | 第55页 |
| 4.2.6 TmDXS的活性检测 | 第55-57页 |
| 4.3 实验结果 | 第57-62页 |
| 4.3.1 表达载体pET28a-TmDXS的构建结果 | 第57-59页 |
| 4.3.2 TmDXS的纯化结果 | 第59-60页 |
| 4.3.4 包涵体柱上复性结果 | 第60页 |
| 4.3.5 TmDXS的活性检测结果 | 第60-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
