| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 环境毒理学 | 第14-15页 |
| 1.1.1 环境毒理学主要研究任务和方法 | 第14页 |
| 1.1.2 环境毒理学研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 生物标志物 | 第15-17页 |
| 1.2.1 生物蓄积与效(反)应 | 第15页 |
| 1.2.2 生物标志物概念与分类 | 第15-16页 |
| 1.2.3 生物标志物的特征 | 第16页 |
| 1.2.4 剂量-效(反)应关系 | 第16-17页 |
| 1.3 定向蛋白组学 | 第17-24页 |
| 1.3.1 定向蛋白组学研究思路 | 第17-18页 |
| 1.3.2 定向蛋白组学的实验设计 | 第18-20页 |
| 1.3.3 定向蛋白组学的定量方法 | 第20-21页 |
| 1.3.4 基于SRM的定向蛋白组学的定量优势与不足 | 第21-22页 |
| 1.3.5 定向蛋白组学研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4 本文的立论依据、研究方法、目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 定向分析毒理学方法的建立 | 第25-42页 |
| 2.1 前言 | 第25-27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验用模式生物 | 第27页 |
| 2.2.2 模式生物培养相关材料 | 第27页 |
| 2.2.3 化合物和试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要仪器和装置 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.3.1 模式生物培养条件 | 第28页 |
| 2.3.2 暴露实验 | 第28-29页 |
| 2.3.3 卵黄蛋白原标准蛋白的酶解 | 第29页 |
| 2.3.4 卵黄蛋白原目标多肽的选择 | 第29-30页 |
| 2.3.5 卵黄蛋白原的胰酶消化效率 | 第30页 |
| 2.3.6 样品前处理 | 第30页 |
| 2.3.7 斑马鱼匀浆中EE_2和VTG目标多肽的UPLC/ESI-MS/MS分析 | 第30-31页 |
| 2.4 结果 | 第31-39页 |
| 2.4.1 斑马鱼体重与总蛋白浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.2 卵黄蛋白原目标多肽的确定 | 第32页 |
| 2.4.3 EE_2和目标多肽AR定量离子的确定 | 第32-33页 |
| 2.4.4 EE_2和目标多肽AR的标准曲线 | 第33-36页 |
| 2.4.5 卵黄蛋白原胰酶消化效率的确定 | 第36页 |
| 2.4.6 用TAT方法同时测定暴露于EE_2的斑马鱼体内的EE_2和VTG | 第36-39页 |
| 2.5 讨论 | 第39-40页 |
| 2.6 本章小结 | 第40-42页 |
| 3 定向分析毒理学方法的优化 | 第42-49页 |
| 3.1 前言 | 第42-43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.2.1 化合物和试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 主要仪器和装置 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-45页 |
| 3.3.1 合适长度目标长肽的选择 | 第44-45页 |
| 3.3.2 提高EE_2回收率的前处理优化 | 第45页 |
| 3.3.3 EE_2和VTG目标多肽的UPLC/ESI-MS/MS分析 | 第45页 |
| 3.4 结果 | 第45-47页 |
| 3.4.1 合适长度目标长肽的确定 | 第45-46页 |
| 3.4.2 提高EE_2回收率的前处理方法优化结果 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-48页 |
| 3.6 本章小结 | 第48-49页 |
| 4 定向分析毒理学方法的初步应用 | 第49-77页 |
| 4.1 前言 | 第49-52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-55页 |
| 4.2.1 实验用细胞系 | 第52页 |
| 4.2.2 细胞培养相关材料 | 第52页 |
| 4.2.3 化合物和试剂 | 第52-54页 |
| 4.2.4 主要仪器和装置 | 第54-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 4.3.1 三个标准蛋白的酶解 | 第55页 |
| 4.3.2 三个蛋白质目标多肽的选择 | 第55-56页 |
| 4.3.3 三个蛋白质的胰酶消化效率 | 第56页 |
| 4.3.4 细胞培养、冻存和复苏 | 第56页 |
| 4.3.5 MTT法检测细胞活性 | 第56-57页 |
| 4.3.6 细胞暴露实验 | 第57页 |
| 4.3.7 细胞裂解混合液中总蛋白浓度的测定 | 第57页 |
| 4.3.8 细胞裂解混合液的酶解 | 第57-58页 |
| 4.3.9 细胞裂解混合液中OPFR/s和三个目标多肽的UPLC/ESI-MS/MS分析 | 第58-59页 |
| 4.3.10 细胞培养上清液中TNF-alpha蛋白的ELISA分析 | 第59-60页 |
| 4.4 结果 | 第60-75页 |
| 4.4.1 三个蛋白质目标多肽的确定 | 第60页 |
| 4.4.2 OPFRs和三个目标多肽定量离子的确定 | 第60-63页 |
| 4.4.3 OPFRs和三个目标多肽的标准曲线 | 第63-68页 |
| 4.4.4 三个蛋白质胰酶消化效率的确定 | 第68页 |
| 4.4.5 有机磷阻燃剂对A549细胞MTT实验结果 | 第68-71页 |
| 4.4.6 细胞裂解混合液中总蛋白浓度及用TAT方法同时测定其中的OPFR/s和三个目标多肽 | 第71-74页 |
| 4.4.7 有机磷阻燃剂单一及复合暴露A549细胞的ELISA测定结果 | 第74-75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-76页 |
| 4.6 本章小结 | 第76-77页 |
| 5 实验结论与研究展望 | 第77-79页 |
| 5.1 主要结论 | 第77页 |
| 5.2 研究展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 攻读硕士期间已发表的论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
