| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-31页 |
| 第一章 硫营养代谢途径及其生物学功能 | 第16-21页 |
| 1 硫同化途径 | 第16-18页 |
| 2 硫营养作用及功能 | 第18-21页 |
| 2.1 硫营养对水稻生长和生理的影响 | 第19-20页 |
| 2.1.1 硫对蛋白质和酶合成的影响 | 第19页 |
| 2.1.2 硫对光合作用的影响 | 第19-20页 |
| 2.1.3 硫对其他生长和生理的影响 | 第20页 |
| 2.2 硫营养对水稻白叶枯病菌生长和生理影响 | 第20-21页 |
| 第二章 细菌毒素及水稻白叶枯病菌毒素 | 第21-25页 |
| 1 水稻白叶枯病菌致病毒素的性质及作用 | 第21-23页 |
| 1.1 内毒素 | 第21-22页 |
| 1.2 非寄主专化性毒素 | 第22-23页 |
| 2 水稻白叶枯病菌致病毒素的相关研究 | 第23页 |
| 3 水稻白叶枯病毒素的危害及合理利用 | 第23-25页 |
| 第三章 水稻白叶枯病XA21介导免疫反应中的磺基转移酶RAXST | 第25-30页 |
| 1 XA21介导的免疫反应 | 第26-27页 |
| 2 XA21介导的免疫反应相关基因rax及其生物学功能 | 第27-28页 |
| 3 磺基转移酶RaxST的研究进展 | 第28-30页 |
| 第四章 本课题的研究目的及意义 | 第30-31页 |
| 第二部分 研究内容 | 第31-78页 |
| 第五章 硫营养对PXO99~A致病毒素合成的影响 | 第31-45页 |
| 1 前言 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.1 菌株与水稻品种 | 第32页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 培养基 | 第32页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2 菌体培养 | 第33页 |
| 2.3 粗毒素提取 | 第33-34页 |
| 2.4 粗毒素生物活性测定 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-44页 |
| 3.1 粗毒素母液质量浓度的确定 | 第35页 |
| 3.2 粗毒素稀释液对水稻露白种子的影响 | 第35-44页 |
| 3.2.1 不同浓度粗毒素对水稻种子胚根胚芽生长的影响 | 第35-40页 |
| 3.2.2 不同硫浓度培养条件获得的粗毒素对水稻种子胚根胚芽的影响 | 第40-44页 |
| 4 讨论与分析 | 第44-45页 |
| 第六章 硫营养对PXO99~A磺基转移酶RAXST合成的影响 | 第45-60页 |
| 1 前言 | 第45-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-54页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 2.1.2 酶与生化试剂 | 第46页 |
| 2.1.3 培养基 | 第46页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.2 pSKB4-raxST-ECFP载体构建 | 第47-51页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第47页 |
| 2.2.2 PCR及DNA电泳 | 第47-48页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化及连接 | 第48页 |
| 2.2.4 感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| 2.2.5 转化 | 第49页 |
| 2.2.6 保存菌种及测序 | 第49页 |
| 2.2.7 质粒提取 | 第49-50页 |
| 2.2.8 酶切 | 第50页 |
| 2.2.9 割胶回收 | 第50-51页 |
| 2.2.10 连接与转化 | 第51页 |
| 2.3 pSKB4-raxST-ECFP电转化PXO99~A | 第51-53页 |
| 2.3.1 PXO99~A电转化感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 2.3.2 电转化 | 第51-52页 |
| 2.3.3 突变菌株的鉴定 | 第52-53页 |
| 2.4 PXO99~A-raxST-ECFP突变菌株的生长曲线测定 | 第53页 |
| 2.4.1 制备菌悬液 | 第53页 |
| 2.4.2 细菌生长曲线测定 | 第53页 |
| 2.5 PXO99~A-raxST-ECFP突变菌株的荧光检测 | 第53-54页 |
| 2.5.1 样品处理 | 第53-54页 |
| 2.5.2 荧光检测 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-59页 |
| 3.1 pSKB4-raxST-ECFP载体的酶切验证 | 第54-55页 |
| 3.2 PXO99~A-raxST-ECFP突变菌株的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3 PXO99~A-raxST-ECFP突变菌株的生长曲线 | 第56-57页 |
| 3.3.1 NB培养基培养条件下的PXO99~A-raxST-ECFP生长曲线 | 第56页 |
| 3.3.2 硫梯度培养基培养条件下的PXO99~A-raxST-ECFP生长曲线 | 第56-57页 |
| 3.4 PXO99~A-raxST-ECFP突变菌株的荧光检测 | 第57-59页 |
| 3.4.1 不同生长时期的PXO99~A-raxST-ECFP荧光检测 | 第57-58页 |
| 3.4.2 硫梯度培养条件下的PXO99~A-raxST-ECFP荧光检测 | 第58-59页 |
| 4 讨论与分析 | 第59-60页 |
| 第七章 RAXST的原核表达、纯化及活性分析 | 第60-78页 |
| 1 前言 | 第60-61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-68页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第61页 |
| 2.1.1 载体与生化试剂 | 第61页 |
| 2.1.2 LB培养基 | 第61页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第61页 |
| 2.2 pMALc2E-fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST四种表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第61-62页 |
| 2.2.2 PCR及DNA电泳 | 第62页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第62页 |
| 2.2.4 酶切与连接 | 第62页 |
| 2.2.5 转化与菌种保存 | 第62页 |
| 2.3 pMALc2E-fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST的诱导表达与纯化 | 第62-64页 |
| 2.3.1 IPTG诱导 | 第62-63页 |
| 2.3.2 相关试剂配制与透析袋预处理 | 第63页 |
| 2.3.2.1 相关试剂的配制 | 第63页 |
| 2.3.2.2 透析袋预处理 | 第63页 |
| 2.3.3 菌体破碎 | 第63页 |
| 2.3.4 Amylose Resin亲和层析 | 第63-64页 |
| 2.3.5 透析与浓缩 | 第64页 |
| 2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第64-66页 |
| 2.4.1 制胶 | 第64-65页 |
| 2.4.2 样品处理及上样 | 第65页 |
| 2.4.3 电泳 | 第65页 |
| 2.4.4 染色与脱色 | 第65-66页 |
| 2.5 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第66页 |
| 2.5.1 试剂配制 | 第66页 |
| 2.5.2 绘制标准曲线 | 第66页 |
| 2.5.3 蛋白质样品的浓度测定 | 第66页 |
| 2.6 fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST-MBP四种融合蛋白质的活性测定 | 第66-68页 |
| 2.6.1 17肽的保存与溶解 | 第66-67页 |
| 2.6.2 酶联反应 | 第67-68页 |
| 3 实验结果 | 第68-77页 |
| 3.1 pMALc2E-fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST四种表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 3.2 pMALc2E-fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST的诱导表达及纯化 | 第69-71页 |
| 3.3 fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST-MBP四种融合蛋白质的的定量 | 第71-72页 |
| 3.4 fRaxST/tnRaxST/tcRaxST/tcnRaxST-MBP四种融合蛋白质的活性测定 | 第72-77页 |
| 4 讨论与分析 | 第77-78页 |
| 结论与展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
