| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1. 动物基因打靶的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1 动物基因打靶的简介 | 第10-11页 |
| 1.2 动物基因打靶技术的应用和前景 | 第11-12页 |
| 1.3 基因打靶的新技术 | 第12-14页 |
| 1.4 动物基因打靶中存在的障碍和优化措施 | 第14-15页 |
| 2. TALENs基因定点修饰技术研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 TALENs基因修饰技术简介 | 第15-16页 |
| 2.2 TALENs的基本结构与技术原理 | 第16-17页 |
| 2.3 TALENs的设计与构建 | 第17-18页 |
| 2.4 TALENs的应用和展望 | 第18-19页 |
| 3. 人乳铁蛋白的研究进展 | 第19-23页 |
| 3.1 人乳铁蛋白的基因及其蛋白 | 第20页 |
| 3.2 人乳铁蛋白的主要生理作用 | 第20-21页 |
| 3.3 转基因动物乳腺特异性表达重组hLF的研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 山羊BLG基因TALENs的设计与构建 | 第23-29页 |
| 1. 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 主要试剂 | 第23页 |
| 1.2 试验仪器及器材 | 第23-24页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.1 BLG基因的检索 | 第24页 |
| 2.2 TALENs的设计 | 第24-25页 |
| 2.3 TALENs表达载体的构建与鉴定 | 第25-28页 |
| 3. 结果 | 第28-29页 |
| 第三章 乳腺特异性表达hLF基因打靶载体的构建 | 第29-41页 |
| 1. 试验材料 | 第29-31页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第29页 |
| 1.2 试验仪器 | 第29-30页 |
| 1.3 分子生物学试剂 | 第30页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2. 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.1 PCR引物合成和测序 | 第31页 |
| 2.2 常规分子生物学的操作方法 | 第31页 |
| 2.3 质粒酶切反应 | 第31-32页 |
| 2.4 酶切产物的回收 | 第32-33页 |
| 2.5 连接反应 | 第33页 |
| 3. 乳腺特异性打靶载体的构建 | 第33-39页 |
| 3.1 PCR扩增BLG5’、BLG3’调控序列和乳腺特异性表达载体功能区 | 第33-36页 |
| 3.2 山羊BLG5’调控序列和乳腺特异性表达载体功能区相连 | 第36页 |
| 3.3 山羊BLG3’调控序列和表达载体BF相连 | 第36页 |
| 3.4 含单个负筛选HSV-TK基因与乳腺特异性表达载体BFN-7相连 | 第36-39页 |
| 4. 结果 | 第39-41页 |
| 4.1 山羊BLG5’和BLG3’调控序列的扩增 | 第39页 |
| 4.2 PCR扩增乳腺特异性表达载体功能区 | 第39-40页 |
| 4.3 乳腺特异性表达hLF基因打靶载体的构建 | 第40-41页 |
| 第四章 基因打靶细胞系和基因打靶山羊的制备 | 第41-53页 |
| 1. 试验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 试验仪器 | 第41页 |
| 1.2 试验器械 | 第41-42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 1.4 试验动物 | 第42页 |
| 2. 试验方法 | 第42-49页 |
| 2.1 胎儿成纤维细胞的准备 | 第42-44页 |
| 2.2 打靶载体与TALENs转染胎儿成纤维细胞 | 第44-45页 |
| 2.3 细胞株PCR检测 | 第45-48页 |
| 2.4 体细胞核移植制作基因打靶山羊胎儿 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-51页 |
| 3.1 抗性细胞株的整合检测 | 第49-51页 |
| 3.2 转染基因打靶载体细胞统计结果 | 第51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 全文总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
