| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| Abbreviation | 第15-16页 |
| CHAPTER 1 INTRODUCTION | 第16-35页 |
| 1.1 Background | 第16-31页 |
| 1.1.1 LTBR Gene Family | 第16-18页 |
| 1.1.2 LTβR discovery and molecular characterization | 第18-24页 |
| 1.1.3 LTβR gene biological functions | 第24-31页 |
| 1.2 Crispr/cas9 and targeted genome editing | 第31-32页 |
| 1.3 Porcine IPEC-J2 intestinal epithelial cells in microbiological investigations | 第32-33页 |
| 1.4 Significance and objectives | 第33-35页 |
| 1.4.1 Significance | 第33页 |
| 1.4.2 Objectives | 第33-35页 |
| CHAPTER 2 MATERIALS AND METHODS | 第35-46页 |
| 2.1 Animals and tissue preparation | 第35页 |
| 2.2 Equipments and Reagents | 第35-36页 |
| 2.2.1 The following apparatus were used | 第35-36页 |
| 2.2.2 Reagent and Materials | 第36页 |
| 2.3 RNA Extraction | 第36-37页 |
| 2.4 Reverse Transcription (cDNA synthesis) | 第37-38页 |
| 2.5 Real-time Quantitative PCR | 第38-39页 |
| 2.6 Pig (LargeWhite) LTBR cloning: | 第39页 |
| 2.7 Genomic DNA amplification &sequence analysis and Genetic variationidentification | 第39-40页 |
| 2.8 IPEC-J2 Cell culture | 第40-41页 |
| 2.8.1 Cell Recovery | 第40页 |
| 2.8.2 Cell passage | 第40页 |
| 2.8.3 Cell frozen | 第40-41页 |
| 2.8.4 Exposure of IPEC-J2 epithelial cell lines to LPS | 第41页 |
| 2.8.5 Exposure of IPEC-J2 epithelial cell lines to IFN-γ | 第41页 |
| 2.9 Gene targeting by CRISPR/CAS9 system | 第41-44页 |
| 2.10 Cell proliferation CCK8 | 第44页 |
| 2.11 Flow Cytometry Assay | 第44页 |
| 2.12 Western Bloting | 第44页 |
| 2.13 Real-time Cell Apoptosis Assay | 第44-45页 |
| 2.14 Semi-PCR | 第45-46页 |
| CHAPTER 3 RESULTS AND ANALYSIS | 第46-61页 |
| 3.1 LTβR cloning and molecular characterization | 第46-51页 |
| 3.1.1 Porcine LTβR gene structure | 第46-47页 |
| 3.1.2 LTβR expression profile | 第47-48页 |
| 3.1.3 Detection of LTβR polymorphism alleles and genetic variation identification | 第48-51页 |
| 3.2 Effect of LPS and IFNγ on LTβR in IPEC-J2 cells | 第51-52页 |
| 3.2.1 LPS effects on Lymphotoxin beta receptor expression in IPEC-J2 epithelial cells | 第51-52页 |
| 3.2.2 Infection of IPEC-J2 epithelial cell lines with Interferon gamma (IFNγ) | 第52页 |
| 3.3 Generation and validation of LTβR-/- KO cells by CRISPR/CAS9 | 第52-57页 |
| 3.3.1 Identification of IPEC-J2 LTBR targeting cell lines | 第52-55页 |
| 3.3.2 IPEC-J2 LTBR knockout cell line verification | 第55-57页 |
| 3.4 LTβR knockout inhibit IPEC-J2 cells proliferation | 第57-58页 |
| 3.5 LTβR knockout dysregulate IPEC-J2 cells cycle | 第58-59页 |
| 3.6 Real-time IPEC-J2 Cell Apoptosis Assay | 第59页 |
| 3.7 LTBR apoptotic genes profile | 第59-61页 |
| CHAPTER 4 Discussion and Conclusion | 第61-65页 |
| 4.1 Discussion | 第61-63页 |
| 4.2 Conclusion | 第63-65页 |
| Reference | 第65-70页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第70-71页 |
| DEDICATION | 第71-72页 |
| Author Biography | 第72页 |
