| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-20页 |
| 1 CHO细胞表达系统概述 | 第10-15页 |
| ·真核生物蛋白常用表达系统的比较 | 第10-11页 |
| ·CHO细胞表达系统简介 | 第11-15页 |
| 2 BMPs的研究概况 | 第15-20页 |
| ·BMPs的结构特征 | 第15-16页 |
| ·BMPs的信号传递 | 第16-17页 |
| ·BMPs与器官发育 | 第17页 |
| ·BMPs与骨诱导 | 第17-18页 |
| ·BMPs的临床应用研究 | 第18-19页 |
| ·BMPs的重组表达研究 | 第19-20页 |
| 第一章 实验材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第21-23页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·质粒小提 | 第24页 |
| ·PCR反应 | 第24-25页 |
| ·限制性内切酶酶切质粒 | 第25页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第25-26页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR | 第26页 |
| ·hBMP4和hBMP7重组表达质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·质粒中量提取(Qiagen-tip100试剂盒提取) | 第28页 |
| ·CHO/DG44细胞的培养 | 第28-29页 |
| ·NIH3T3细胞的培养 | 第29页 |
| ·细胞计数 | 第29页 |
| ·重组CHO/DG44细胞株的构建 | 第29-30页 |
| ·表达产物的DOT-BLOT分析 | 第30-31页 |
| ·表达产物的WESTERN-BLOT分析 | 第31页 |
| ·表达产物的分离纯化 | 第31-32页 |
| ·hBMP4多拷贝表达盒的扩增 | 第32页 |
| ·ELISA方法定量分析rhBMP4 | 第32页 |
| ·有限稀释筛选高表达细胞株 | 第32-33页 |
| ·纯化后的rhBMP4生物活性测定 | 第33-34页 |
| 第二章 实验结果 | 第34-48页 |
| ·hBMP4在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究 | 第34-43页 |
| ·hBMP4重组表达质粒的构建 | 第34页 |
| ·hBMP4重组CHO/DG44细胞株的构建 | 第34-36页 |
| ·rhBMP4在重组CHO/DG44细胞中的表达检测 | 第36-37页 |
| ·表达产物的初步纯化及鉴定 | 第37-38页 |
| ·hBMP4多拷贝表达盒的扩增及表达量的测定 | 第38-40页 |
| ·有限稀释法筛选高表达细胞株 | 第40-42页 |
| ·纯化后的rhBMP4生物活性鉴定 | 第42-43页 |
| ·hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究 | 第43-48页 |
| ·hBMP7重组表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·hBMP7重组CHO/DG44细胞株的构建 | 第44-45页 |
| ·hBMP7在重组CHO/DG44细胞中的表达检测 | 第45-48页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第48-52页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·转染效率 | 第49页 |
| ·重组细胞中hBMP4的表达产物分析 | 第49-50页 |
| ·多拷贝表达盒的扩增 | 第50页 |
| ·有限稀释法筛选高表达细胞株 | 第50-51页 |
| ·rhBMP4的活性鉴定 | 第51-52页 |
| 第四章 结论 | 第52-54页 |
| 附录 | 第54-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
