| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 一、引言 | 第14-25页 |
| 1.1 植物细胞壁概述 | 第14页 |
| 1.2 植物细胞次生壁 | 第14-19页 |
| 1.2.1 纤维素结构及生物合成 | 第15页 |
| 1.2.2 木质素结构及生物合成 | 第15-16页 |
| 1.2.3 半纤维素结构及生物合成 | 第16-19页 |
| 1.3 植物细胞次生壁合成的转录调控 | 第19-21页 |
| 1.3.1 NAC转录因子 | 第19-20页 |
| 1.3.2 MYB转录因子 | 第20-21页 |
| 1.4 棉纤维 | 第21-23页 |
| 1.4.1 棉纤维细胞发育 | 第21-22页 |
| 1.4.2 棉纤维细胞次生壁合成相关基因研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4.3 棉纤维细胞木聚糖研究进展 | 第23页 |
| 1.5 立题依据及研究意义 | 第23-25页 |
| 二、实验材料与方法 | 第25-33页 |
| 2.1 菌种及材料 | 第25页 |
| 2.2 载体、试剂及工具酶 | 第25页 |
| 2.3 常用储液,缓冲液及培养基 | 第25页 |
| 2.4 实验仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.5 拟南芥及棉花GDNA提取方法 | 第26页 |
| 2.6 拟南芥及棉花纤维RNA提取及逆转录方法 | 第26页 |
| 2.7 农杆菌感受态的制备及重组质粒电转农杆菌 | 第26页 |
| 2.8 拟南芥转化及转基因拟南芥筛选 | 第26页 |
| 2.9 植物组织树脂(EMBED812)半薄切片 | 第26-28页 |
| 2.9.1 材料固定及脱水 | 第26-27页 |
| 2.9.2 树脂包埋 | 第27-28页 |
| 2.9.3 树脂半薄切片制作 | 第28页 |
| 2.9.4 脱树脂方案 | 第28页 |
| 2.10 植物组织树脂(LR WHITE)半薄切片 | 第28-29页 |
| 2.10.1 材料固定及脱水 | 第28页 |
| 2.10.2 树脂包埋 | 第28-29页 |
| 2.10.3 树脂半薄切片制作 | 第29页 |
| 2.11 植物组织石蜡切片 | 第29-30页 |
| 2.11.1 实验所需溶液配制及材料固定及脱水步骤 | 第29页 |
| 2.11.2 石蜡包埋 | 第29页 |
| 2.11.3 石蜡切片制作 | 第29-30页 |
| 2.11.4 脱石蜡及复水方案 | 第30页 |
| 2.12 细胞壁染色剂配制与使用方法 | 第30页 |
| 2.13 多聚赖氨酸载玻片的处理方案 | 第30-31页 |
| 2.14 酿酒酵母转录自激活活性检测 | 第31页 |
| 2.15 植物组织GUS染色 | 第31页 |
| 2.16 HIS融合蛋白诱导、小量纯化及WESTERN BLOTTING | 第31-32页 |
| 2.16.1 蛋白诱导 | 第31页 |
| 2.16.2 HIS融合蛋白小量纯化 | 第31页 |
| 2.16.3 WESTERN BLOTTING检测目的蛋白 | 第31-32页 |
| 2.17 酵母单杂交 | 第32-33页 |
| 三、实验结果 | 第33-56页 |
| 3.1 拟南芥fra8突变体中表达GhGT47A不能回复突变体表型 | 第33-35页 |
| 3.1.1 fra8突变体鉴定 | 第33页 |
| 3.1.2 回补突变体植株阳性鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.3 回补突变体分析 | 第34-35页 |
| 3.2 GhGT47A RNAI转基因棉花分析 | 第35-39页 |
| 3.2.1 T1代及T2代GhGT47A RNAi转基因棉花阳性鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.2 T2代转基因棉花GhGT47A表达量检测 | 第36-37页 |
| 3.2.3 T2代GhGT47A RNAi转基因棉花表型观察 | 第37-38页 |
| 3.2.4 T2代GhGT47A RNAi转基因棉花20DPA及成熟纤维半薄树脂切片染色观察 | 第38-39页 |
| 3.3 过量表达GhGT47A转基因棉花分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 T0、T1和T2代过量表达GhGT47A转基因棉花阳性鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.2 T2代过量表达GhGT47A转基因棉花表型分析 | 第41-42页 |
| 3.4 GhMYB1G组织表达分析 | 第42页 |
| 3.5 GhMYB1G具有转录自激活活性 | 第42-44页 |
| 3.6 GhMYB1G启动子活性分析 | 第44-45页 |
| 3.6.1 转基因拟南芥阳性鉴定 | 第44页 |
| 3.6.2 启动子GUS组织化学活性分析 | 第44-45页 |
| 3.7 拟南芥中表达GhMYB1G影响转基因拟南芥次生壁合成 | 第45-52页 |
| 3.7.1 过量表达GhMYB1G转基因拟南芥阳性鉴定 | 第45页 |
| 3.7.2 过量表达GhMYB1G转基因拟南芥表型分析 | 第45-46页 |
| 3.7.3 过量表达GhMYB1G转基因拟南芥花序茎切片染色观察 | 第46-50页 |
| 3.7.4 过量表达GhMYB1G转基因拟南芥主根切片染色观察 | 第50-52页 |
| 3.8 拟南芥中表达GhMYB1G影响转基因拟南芥茎次生壁组分合成基因的表达 | 第52页 |
| 3.9 GhMYB1G可能参与调控GhGT47A的表达 | 第52-56页 |
| 3.9.1 HIS-GhMYB1G融合蛋白诱导 | 第53-54页 |
| 3.9.2 酵母单杂交实验验证GhMYB1G可以与GhGT47A启动子结合 | 第54-56页 |
| 四、讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 不同种类植物间木聚糖合成机制保守性与差异性共存 | 第56-57页 |
| 4.2 GhGT47A可能参与棉纤维细胞壁合成 | 第57页 |
| 4.3 过量表达GhMYB1G影响拟南芥细胞次生壁合成 | 第57-58页 |
| 4.4 GhMYB1G可能调控GhGT47A的表达 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
