英文缩略词表 | 第5-6页 |
中文摘要 | 第6-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
前言 | 第12-15页 |
材料与方法 | 第15-25页 |
1 材料 | 第15-16页 |
1.1 菌和细胞 | 第15页 |
1.2 质粒 | 第15页 |
1.3 分子生物学试剂 | 第15页 |
1.4 抗体 | 第15页 |
1.5 主要仪器设备 | 第15-16页 |
1.6 常用溶液配方 | 第16页 |
2 方法 | 第16-25页 |
2.1 构建重组质粒 | 第16-17页 |
2.2 质粒的提取 | 第17页 |
2.3 转染 | 第17-18页 |
2.4 Western Blot | 第18-19页 |
2.5 纯化蛋白 | 第19-20页 |
2.6 免疫共沉淀 | 第20页 |
2.7 GST pull-down | 第20-21页 |
2.8 免疫荧光 | 第21页 |
2.9 诱导自噬 | 第21页 |
2.10 体外脂化实验 | 第21页 |
2.11 流式检测LC3-II | 第21-22页 |
2.12 透射电子显微镜 | 第22页 |
2.13 MEF的获取 | 第22-23页 |
2.14 统计分析 | 第23-25页 |
结果 | 第25-39页 |
1 筛选GA6相互作用蛋白 | 第25-28页 |
1.1 质谱法检测到GA6与LC3有相互作用 | 第25-26页 |
1.2 快速蛋白液相色谱法检测到GA6与LC3能形成一个复合物 | 第26-27页 |
1.3 免疫共沉淀法检测到GA6与LC3蛋白有相互作用 | 第27-28页 |
1.4 GST pull-down检测到GA6与LC3有直接相互作用 | 第28页 |
2 GA6抑制自噬 | 第28-33页 |
2.1 免疫荧光分析GA6抑制自噬 | 第28-30页 |
2.2 GA6抑制自噬表现为LC3-II生成障碍 | 第30-32页 |
2.3 GA6抑制自噬体的形成 | 第32-33页 |
2.4 GA6抑制自噬不依赖于mTOR通路 | 第33页 |
3 GA6抑制LC3的切割 | 第33-36页 |
3.1 体内实验检测到GA6抑制Atg4B对LC3的切割 | 第33-34页 |
3.2 体外实验检测到GA6抑制Atg4B对LC3的切割 | 第34-35页 |
3.3 GA6与Atg4B竞争性结合于LC3 | 第35-36页 |
4 GA6抑制LC3的脂化 | 第36-38页 |
5 GA6在动物水平对自噬的影响 | 第38-39页 |
讨论 | 第39-41页 |
结论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-47页 |
附录 | 第47-48页 |
发表文章 | 第48-49页 |
个人简历 | 第49-50页 |
致谢 | 第50页 |