| 英文缩略词表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第16-23页 |
| 1. 国内外研究现状 | 第16-19页 |
| 2. 立体依据与研究方案 | 第19-21页 |
| 3. 研究目标与意义 | 第21-23页 |
| 第一部分 建立靶向人CCR5基因的CRISPR/Cas9基因编辑体系 | 第23-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-34页 |
| 1.1 材料 | 第24-26页 |
| 1.2 方法 | 第26-34页 |
| 2. 结果 | 第34-41页 |
| 2.1 成功构建针对人CCR5基因的sgRNA | 第34-35页 |
| 2.2 建立基于细胞系的高效转染和外源基因表达体系 | 第35-37页 |
| 2.3 筛选出脱靶效率低切割效率高的sgRNA | 第37-41页 |
| 3. 讨论 | 第41-42页 |
| 第二部分 在人HSPC上高效敲除CCR5基因 | 第42-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1 材料 | 第42-43页 |
| 1.2 方法 | 第43-45页 |
| 2. 结果 | 第45-49页 |
| 2.1 高效转染CD34+ HSPC细胞 | 第45-47页 |
| 2.2 在CD34+ HSPC细胞上高效敲除CCR5基因 | 第47-48页 |
| 2.3 转染后的CD34+ HSPC保持体外多系分化能力 | 第48-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-51页 |
| 第三部分 在免疫缺陷小鼠中评价HSPC上的CCR5基因编辑 | 第51-65页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-54页 |
| 1.1 材料 | 第51-52页 |
| 1.2 方法 | 第52-54页 |
| 2. 结果 | 第54-63页 |
| 2.1 人HSPC在免疫缺陷小鼠上重建造血 | 第54-56页 |
| 2.3 小鼠体内评价人HSPC上的CCR5敲除水平 | 第56页 |
| 2.4 基因编辑后HSPC保持长期、多系造血重建能力 | 第56-58页 |
| 2.5 人CCR5基因敲除序列类型分析 | 第58-61页 |
| 2.6 在HSC上检测到CCR5高效敲除 | 第61-63页 |
| 3. 讨论 | 第63-65页 |
| 第四部分 CCR5敲除对抵抗HIV-1 感染的作用 | 第65-72页 |
| 1. 材料与方法 | 第65-68页 |
| 1.1 材料 | 第65-66页 |
| 1.2 方法 | 第66-68页 |
| 2. 结果 | 第68-71页 |
| 2.1 建立高效、稳定的HIV感染的人源化小鼠模型 | 第68-69页 |
| 2.2 在HSPC上的CCR5基因敲除可有效抵御HIV-1 感染 | 第69-70页 |
| 2.3 具有CCR5敲除的细胞在体内的富集效应 | 第70-71页 |
| 3. 讨论 | 第71-72页 |
| 第五部分 临床研究前的安全性评价 | 第72-78页 |
| 1. 材料与方法 | 第72-74页 |
| 1.1 材料 | 第72页 |
| 1.2 方法 | 第72-74页 |
| 2. 结果 | 第74-77页 |
| 2.1 修饰后的细胞无体内、外致瘤性 | 第74-75页 |
| 2.2 无染色体核型异常 | 第75页 |
| 2.3 CCR5基因修饰CD34+细胞具有动物体内输注的安全性 | 第75-76页 |
| 2.4 长期安全性评价 | 第76-77页 |
| 3. 讨论 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附表 | 第88-96页 |
| 附表 1 sgRNA序列信息 | 第88-92页 |
| 附表 2 sgRNA配对信息 | 第92-96页 |
| 个人简历 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
