| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| ·保幼激素滴度的周期性变化 | 第13-14页 |
| ·昆虫蜕皮激素的研究 | 第14-19页 |
| ·昆虫蜕皮激素的合成研究 | 第15页 |
| ·昆虫蜕皮激素的代谢研究 | 第15-17页 |
| ·昆虫蜕皮激素3位脱氢化失活途径的研究 | 第17页 |
| ·昆虫3DE-3β-reductase基因的研究 | 第17-19页 |
| 第二章 引言 | 第19-21页 |
| ·研究背景及意义 | 第19页 |
| ·养蚕业 | 第19页 |
| ·防治害虫 | 第19页 |
| ·化妆品添加剂 | 第19页 |
| ·研究的主要内容 | 第19-20页 |
| ·研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第三章 家蚕Bm3DE-3β-reductase基因的生物信息学和表达特征分析 | 第21-35页 |
| ·材料和试剂 | 第21-23页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要溶液及配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因的生物信息分析 | 第23-24页 |
| ·家蚕组织样品中的总RNA提取 | 第24页 |
| ·RNA检测 | 第24-25页 |
| ·cDNA的制备和检测 | 第25页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因在各个时期的表达特征分析 | 第25-26页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因在各组织中的表达特征分析 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-32页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因结构域分析 | 第28-29页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase同源蛋白的多序列比对分析 | 第29-30页 |
| ·物种间Bm3DE-3β-reductase蛋白同源基因系统发生树重构 | 第30-31页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因在各个时期的表达特征分析 | 第31页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因在各组织中的表达特征分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-35页 |
| 第四章 家蚕Bm3DE-3β-reductase基因的原核表达与抗体制备 | 第35-57页 |
| ·材料 | 第35-42页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·试剂配制 | 第36-41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-48页 |
| ·目的片段的选择与克隆 | 第42页 |
| ·重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第43-46页 |
| ·家蚕Bm3DE-3β-reductase蛋白的纯化及检测 | 第46页 |
| ·抗体的制备及效价检测 | 第46-47页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase组织表达及定位 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·目的片段的克隆 | 第48-49页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase的原核表达及重组蛋白鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗体制备及结果检测 | 第51-52页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase组织表达及定位 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| ·原核表达片段的选择 | 第54页 |
| ·蛋白纯化及抗体制备 | 第54-57页 |
| 第五章 家蚕Bm3DE-3β-reductase基因的真核表达和功能鉴定 | 第57-73页 |
| ·材料 | 第57-61页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·试剂配制 | 第57-61页 |
| ·实验方法与步骤 | 第61-68页 |
| ·目的基因Bm3DE-3β-reductase片段的获得 | 第61页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·连接转化及菌落PCR鉴定 | 第63-64页 |
| ·抽提重组质粒的双酶切鉴定 | 第64页 |
| ·测序及序列分析 | 第64页 |
| ·重组酵母表达菌的制备 | 第64-66页 |
| ·诱导表达上清的浓缩与SDS-PAGE检测 | 第66-67页 |
| ·Western blotting检测表达产物 | 第67-68页 |
| ·酶活检测 | 第68页 |
| ·实验结果与分析 | 第68-72页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase基因克隆 | 第68页 |
| ·阳性E.coli DH5α大肠杆菌的筛选及酶切鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组表达载体与阴性对照空载体的线性化 | 第69-70页 |
| ·Bm-3DE-3β-reductase/pPIC9K在毕赤酵母表型筛选、PCR鉴定 | 第70-71页 |
| ·Bm-3β-reductase/pPIC9K的诱导表达及Western blotting鉴定 | 第71页 |
| ·Bm3DE-3β-reductase/pPIC9K/X33功能检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·表达载体的选择 | 第72页 |
| ·重组表达载体的线性化选择 | 第72页 |
| ·功能鉴定 | 第72页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| 第六章 综合与结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 一. Bm3DE-3β-reductase基因序列 | 第79-80页 |
| 二.pMD18-T simple载体图谱 | 第80-81页 |
| 三.pGEX-4T-1载体图谱 | 第81-82页 |
| 四.pPIC9K载体图谱 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 在校期间发表文章 | 第85页 |
