| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一部分 利用CRISPR/Cas9系统构建基因编辑食蟹猴 | 第13-61页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 实验材料 | 第15-18页 |
| 1.1 实验动物 | 第15页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第15页 |
| 1.3 克隆构建相关试剂 | 第15-16页 |
| 1.4 体外转录及扩增相关试剂 | 第16-17页 |
| 1.5 细胞培养相关试剂 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-39页 |
| 2.1 sgRNA设计与载体构建 | 第18-20页 |
| 2.2 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.3 体外转录sgRNAA | 第21-24页 |
| 2.4 体外转录Cas9 mRNA | 第24-26页 |
| 2.5 细胞培养与细胞转染 | 第26-28页 |
| 2.6 细胞水平基因编辑鉴定 | 第28-31页 |
| 2.7 食蟹猴受精卵获取与原核注射 | 第31-32页 |
| 2.8 基因编辑猴鉴定 | 第32-36页 |
| 2.9 基因敲入猴同源重组载体构建 | 第36-37页 |
| 2.10 基因敲入猴基因鉴定 | 第37-39页 |
| 实验结果 | 第39-58页 |
| 3.1 Nr0b1、Ppar-γ、Rag1 sgRNA在COS7细胞编辑效率验证 | 第39-40页 |
| 3.2 Nr0b1、Ppar-γ、Rag1 sgRNA在猴囊胚编辑效率验证 | 第40-43页 |
| 3.3 运用Nr0b1、Ppar-γ、 Rag1 sgRNA成功构建阳性编辑猴 | 第43-46页 |
| 3.4 食蟹猴基因编辑染色体来源鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5 流产猴基因编辑鉴定 | 第47-51页 |
| 3.6 用于定点敲入的sgRNA效率及脱靶效应检测 | 第51-53页 |
| 3.7 基因定点敲入Oct4-IRES-hrGFP猴囊胚检测 | 第53-55页 |
| 3.8 基因定点敲入Oct4-IRES-hrGFP流产猴检测 | 第55-56页 |
| 3.9 基因定点敲入Oct4-IRES-hrGFP活猴检测 | 第56-58页 |
| 讨论 | 第58-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 第二部分 基于点突变小鼠模型构建的CRISPR/Cas9方法优化 | 第61-97页 |
| 引言 | 第61-63页 |
| 实验材料 | 第63-65页 |
| 1.1 实验动物 | 第63页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第63页 |
| 1.3 克隆构建相关试剂 | 第63-64页 |
| 1.4 体外转录相关试剂 | 第64页 |
| 1.5 细胞培养相关试剂 | 第64-65页 |
| 实验方法 | 第65-79页 |
| 2.1 sgRNA设计与载体构建 | 第65-68页 |
| 2.2 质粒提取 | 第68-69页 |
| 2.3 细胞培养与细胞转染 | 第69-71页 |
| 2.4 细胞电转 | 第71页 |
| 2.5 细胞水平基因编辑鉴定 | 第71-73页 |
| 2.6 细胞水平脱靶检测 | 第73-78页 |
| 2.7 小鼠受精卵获取与原核注射 | 第78页 |
| 2.8 点突变小鼠基因型鉴定 | 第78-79页 |
| 实验结果 | 第79-91页 |
| 3.1 细胞水平点突变验证 | 第79-81页 |
| 3.2 不同ssODN对重组效率的影响 | 第81-82页 |
| 3.3 ssODN与sgRNA位置关系对重组效率的影响 | 第82页 |
| 3.4 利用CRISPR/Cas9系统结合ssODN构建点突变小鼠 | 第82-88页 |
| 3.5 点突变小鼠设计方法总结 | 第88-91页 |
| 讨论 | 第91-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 文献综述 基因编辑技术进展 | 第97-124页 |
| 1.1 传统基因打靶技术 | 第97-99页 |
| 1.2 基于ZFN的基因编辑技术 | 第99-101页 |
| 1.3 基于TALEN的基因编辑技术 | 第101-102页 |
| 1.4 基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术 | 第102-113页 |
| 1.5 小结 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
