| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 绪言 | 第11-19页 |
| 1.1 阿维菌素类药物 | 第11-13页 |
| 1.1.1 阿维菌素研究概述 | 第11-12页 |
| 1.1.2 伊维菌素 | 第12页 |
| 1.1.3 多拉菌素 | 第12-13页 |
| 1.2 多拉菌素的结构和功能 | 第13-16页 |
| 1.2.1 多拉菌素的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 多拉菌素的化学结构 | 第14-15页 |
| 1.2.3 多拉菌素的杀虫机理 | 第15页 |
| 1.2.4 多拉菌素的抗虫谱 | 第15-16页 |
| 1.2.5 多拉菌素在兽医临床上的应用 | 第16页 |
| 1.3 多拉菌素的生物合成 | 第16-18页 |
| 1.3.1 阿维菌素合成相关基因 | 第16-17页 |
| 1.3.2 多拉菌素产生菌株的构建 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| 2.1 材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4 常规试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.5 设备仪器 | 第23页 |
| 2.1.6 应用软件 | 第23页 |
| 2.2 实验步骤 | 第23-30页 |
| 2.2.1 菌种的培育和保存 | 第23-24页 |
| 2.2.2 质粒DNA的提取和检测 | 第24页 |
| 2.2.3 感受态细胞制备 | 第24-25页 |
| 2.2.4 转化 | 第25-26页 |
| 2.2.5 电泳检测和片段回收 | 第26-27页 |
| 2.2.6 DNA连接 | 第27页 |
| 2.2.7 DNA测序和全基因合成 | 第27页 |
| 2.2.8 链霉菌总DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.9 质粒DNA的接合转移 | 第28页 |
| 2.2.10 基因缺失菌株鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.11 阿维链霉菌摇瓶发酵 | 第29页 |
| 2.2.12 多拉菌素测定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-46页 |
| 3.1 bkdFGH基因缺失突变株的构建 | 第30-37页 |
| 3.1.1 交换臂PCR引物设计 | 第30页 |
| 3.1.2 PCR扩增和TA克隆 | 第30-31页 |
| 3.1.3 bkdFGH基因缺失载体构建 | 第31-33页 |
| 3.1.4 基因缺失供体菌的构建 | 第33页 |
| 3.1.5 同源双交换法缺失bkdFGH基因 | 第33-34页 |
| 3.1.6 bkdFGH基因缺失突变株的筛选 | 第34页 |
| 3.1.7 bkdFGH基因缺失突变株的验证 | 第34-36页 |
| 3.1.8 bkdFGH基因缺失突变株合成多拉菌素的检测 | 第36-37页 |
| 3.2 aveD基因缺失突变株的构建 | 第37-41页 |
| 3.2.1 交换臂PCR引物设计 | 第37页 |
| 3.2.2 PCR扩增和TA克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.3 aveD基因缺失载体构建 | 第38页 |
| 3.2.4 基因缺失供体菌的构建 | 第38页 |
| 3.2.5 同源双交换法缺失aveD基因 | 第38-39页 |
| 3.2.6 aveD基因缺失突变株的筛选与验证 | 第39-40页 |
| 3.2.7 aveD基因缺失突变株合成多拉菌素的检测 | 第40-41页 |
| 3.3 aveC基因缺失和突变菌株的构建 | 第41-44页 |
| 3.3.1 aveC基因缺失突变株的构建 | 第42页 |
| 3.3.2 aveC基因定点突变株的构建 | 第42页 |
| 3.3.3 aveC基因整合型突变株的验证 | 第42-43页 |
| 3.3.4 aveC突变株合成多拉菌素的检测 | 第43-44页 |
| 3.3.5 突变菌株的遗传稳定性检测 | 第44页 |
| 3.4 多拉菌素产生菌株的发酵条件 | 第44-46页 |
| 3.4.1 发酵时间对多拉菌素合成的影响 | 第44页 |
| 3.4.2 单一氮源对多拉菌素合成的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 无机盐离子对多拉菌素合成的影响 | 第45-46页 |
| 4 结论与讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 讨论 | 第46-47页 |
| 4.1.1 bkdFGH基因缺失突变株的构建 | 第46页 |
| 4.1.2 bkdFGH和aveD双基因缺失突变株的构建 | 第46页 |
| 4.1.3 aveC基因的改造 | 第46-47页 |
| 4.1.4 多拉菌素产生菌株的发酵条件 | 第47页 |
| 4.2 实验结论 | 第47-48页 |
| 4.3 实验创新点 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录：攻读学位期间取得的研究成果 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
