| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 青稞概述 | 第13-14页 |
| 2 类黄酮概述 | 第14-16页 |
| 2.1 基本结构 | 第14页 |
| 2.2 功能 | 第14-15页 |
| 2.3 分类 | 第15-16页 |
| 3 植物氧甲基转移酶(OMT)概述 | 第16-18页 |
| 3.1 特点和功能 | 第16页 |
| 3.2 分类 | 第16-18页 |
| 3.2.1 按作用底物分类 | 第16-17页 |
| 3.2.2 按分子量分类 | 第17-18页 |
| 4 类黄酮氧甲基转移酶(FOMT)概述 | 第18-25页 |
| 4.1 催化机理 | 第18-21页 |
| 4.1.1 底物选择性 | 第18页 |
| 4.1.2 结构域 | 第18-19页 |
| 4.1.3 与底物结合模式 | 第19-20页 |
| 4.1.4 转移甲基原理 | 第20-21页 |
| 4.2 基本功能 | 第21-24页 |
| 4.2.1 对植物的作用 | 第21-22页 |
| 4.2.2 对动物及人体的作用 | 第22-24页 |
| 4.3 类黄酮7-氧甲基转移酶(F7-OMT)研究进展 | 第24-25页 |
| 5 研究技术路线、目的与意义 | 第25-28页 |
| 5.1 技术路线 | 第25-26页 |
| 5.2 目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 青稞F7-OMT基因克隆及生物信息学分析 | 第28-59页 |
| 1 材料与方法 | 第28-38页 |
| 1.1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第28页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 1.1.4 主要试剂配方 | 第28-29页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第29-30页 |
| 1.2 方法 | 第30-38页 |
| 1.2.1 RNA提取 | 第30-31页 |
| 1.2.2 RNA检测 | 第31页 |
| 1.2.2.1 浓度及纯度测定 | 第31页 |
| 1.2.2.2 完整性检测 | 第31页 |
| 1.2.3 cDNA第一链合成 | 第31-32页 |
| 1.2.4 青稞F7-OMT基因的获得 | 第32-33页 |
| 1.2.4.1 引物设计 | 第32页 |
| 1.2.4.2 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 1.2.5 TA克隆 | 第33-35页 |
| 1.2.5.1 目的片段的回收 | 第33-34页 |
| 1.2.5.2 目的片段与载体连接 | 第34页 |
| 1.2.5.3 连接载体的转化 | 第34-35页 |
| 1.2.5.4 阳性筛选 | 第35页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 1.2.6.1 碱基序列分析 | 第35页 |
| 1.2.6.2 CDS区密码子分析 | 第35-36页 |
| 1.2.6.3 氨基酸序列比对及保守域预测 | 第36页 |
| 1.2.6.4 系统发育树分析 | 第36页 |
| 1.2.6.5 化性质分析 | 第36页 |
| 1.2.6.6 二级结构预测 | 第36-37页 |
| 1.2.6.7 信号肽预测 | 第37页 |
| 1.2.6.8 跨膜结构预测 | 第37页 |
| 1.2.6.9 糖基化及磷酸化位点预测 | 第37页 |
| 1.2.6.10 二硫键预测 | 第37页 |
| 1.2.6.11 细胞定位 | 第37页 |
| 1.2.6.12 三级结构分析 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-55页 |
| 2.1 总RNA浓度与纯度检测 | 第38-39页 |
| 2.2 cDNA全长获得 | 第39页 |
| 2.3 重组质粒菌液检测 | 第39页 |
| 2.4 生物信息学分析 | 第39-55页 |
| 2.4.1 碱基序列分析 | 第39-42页 |
| 2.4.2 CDS区密码子分析 | 第42-44页 |
| 2.4.3 氨基酸序列比对及保守域预测 | 第44-46页 |
| 2.4.4 系统发育树分析 | 第46-47页 |
| 2.4.5 理化性质分析 | 第47-48页 |
| 2.4.6 二级结构预测 | 第48-49页 |
| 2.4.7 信号肽预测 | 第49页 |
| 2.4.8 跨膜结构预测 | 第49-50页 |
| 2.4.9 糖基化及磷酸化位点预测 | 第50-52页 |
| 2.4.10 二硫键预测 | 第52-53页 |
| 2.4.11 细胞定位 | 第53页 |
| 2.4.12 三级结构分析 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-59页 |
| 3.1 青稞F7-OMT基因克隆 | 第55-56页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第56-59页 |
| 3.2.1 碱基序列及密码子分析 | 第56页 |
| 3.2.2 氨基酸序列及保守域分析 | 第56-57页 |
| 3.2.3 系统发育树分析 | 第57-58页 |
| 3.2.4 蛋白性质结构分析 | 第58-59页 |
| 第三章 青稞F7-OMT基因的原核表达 | 第59-74页 |
| 1 材料与方法 | 第59-67页 |
| 1.1 材料 | 第59-61页 |
| 1.1.1 质粒与菌株 | 第59页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.1.3 主要试剂配方 | 第59-60页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第60-61页 |
| 1.2 方法 | 第61-67页 |
| 1.2.1 带双酶切位点基因的获得 | 第61页 |
| 1.2.1.1 双酶切引物设计 | 第61页 |
| 1.2.1.2 PCR扩增 | 第61页 |
| 1.2.2 带双酶切位点基因的TA克隆 | 第61-62页 |
| 1.2.3 原核表达系统的建立 | 第62-64页 |
| 1.2.3.1 pMD19-T-F7-OMT1和pET-32a质粒提取 | 第62页 |
| 1.2.3.2 pMD19-T-F7-OMT1质粒与pET-32a载体双酶切 | 第62-63页 |
| 1.2.3.3 酶切产物回收纯化 | 第63页 |
| 1.2.3.4 F-OMT与pET-32a载体连接 | 第63页 |
| 1.2.3.5 重组子转化E.coli DH5α | 第63-64页 |
| 1.2.3.6 重组子筛选 | 第64页 |
| 1.2.3.7 pET-32a-F7-OMT1质粒提取 | 第64页 |
| 1.2.3.8 pET-32a-F7-OMT1质粒转化 | 第64页 |
| 1.2.4 重组蛋白的融合表达 | 第64-66页 |
| 1.2.4.1 IPTG诱导表达 | 第64-65页 |
| 1.2.4.2 SDS-PAGE电泳检测 | 第65-66页 |
| 1.2.5 重组蛋白的亲和层析纯化 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| 2.1 重组子双酶切检测 | 第67-69页 |
| 2.1.1 pMD19-T-F7-OMT1双酶切检测 | 第67页 |
| 2.1.2 pET-32a-F7-OMT1双酶切检测 | 第67-69页 |
| 2.2 融合表达分析 | 第69-71页 |
| 2.2.1 IPTG诱导浓度梯度 | 第69-70页 |
| 2.2.2 诱导表达时间梯度 | 第70-71页 |
| 2.3 蛋白纯化 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 3.1 原核表达目的与意义 | 第72页 |
| 3.2 表达系统选择及条件优化 | 第72-73页 |
| 3.3 蛋白纯化分析 | 第73-74页 |
| 第四章 青稞F7-OMT基因相对定量分析 | 第74-82页 |
| 1 材料与方法 | 第74-78页 |
| 1.1 材料 | 第74-75页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第74页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第74页 |
| 1.1.3 主要试剂配制 | 第74页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第74-75页 |
| 1.2 方法 | 第75-78页 |
| 1.2.1 植物材料水培 | 第75页 |
| 1.2.2 植物材料处理 | 第75页 |
| 1.2.3 RNA的提取 | 第75页 |
| 1.2.4 第一链cDNA合成 | 第75-76页 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR | 第76-77页 |
| 1.2.5.1 引物设计 | 第76-77页 |
| 1.2.5.2 实时荧光定量PCR | 第77页 |
| 1.2.6 相对定量分析 | 第77-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-80页 |
| 2.1 融解曲线分析 | 第78-79页 |
| 2.2 相对定量分析 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第93页 |
