| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述:基因表达抑制研究技术与植物天冬酰胺合成酶功能研究进展 | 第15-25页 |
| ·引言 | 第15-16页 |
| ·基因表达抑制研究技术及其在抗病性中的应用 | 第16-18页 |
| ·病毒诱导的基因沉默技术及其在鉴定植物基因功能中的应用 | 第16-17页 |
| ·VIGS的作用机制 | 第16页 |
| ·VIGS在鉴定植物基因功能中的应用 | 第16-17页 |
| ·RNAi技术及其在鉴定植物基因功能中的应用 | 第17-18页 |
| ·RNAi的作用机制及其发展状况 | 第17页 |
| ·RNAi在鉴定植物功能基因中的应用 | 第17-18页 |
| ·VIGS技术和RNAi技术在鉴定植物基因功能上的区别 | 第18页 |
| ·植物天冬酰胺合成酶(AS)基因功能的研究 | 第18-24页 |
| ·植物AS基因的分类 | 第19页 |
| ·植物AS的催化机理及其分子结构 | 第19-22页 |
| ·植物AS基因的组织特异性表达和可诱导表达 | 第22-23页 |
| ·植物AS基因的时间和空间特异性表达 | 第22页 |
| ·植物AS基因的可诱导表达 | 第22-23页 |
| ·植物AS基因的功能 | 第23-24页 |
| ·植物AS基因的生理功能 | 第23页 |
| ·植物AS基因的抗病功能 | 第23-24页 |
| ·本研究的主要目的和研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 番茄天冬酰胺合成酶基因(AS)的克隆及其功能研究 | 第25-38页 |
| ·前言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·植物材料、菌种和质粒 | 第25-26页 |
| ·酶、化学试剂 | 第26页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| ·常用试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·S1AS基因的PCR克隆 | 第27页 |
| ·DNA序列测定及分析 | 第27页 |
| ·S1AS1和NbAS(即b48)基因功能的VIGS分析 | 第27-28页 |
| ·S1AS1转基因结构的构建及瞬时超表达功能研究 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·S1AS1基因的克隆及序列测定 | 第29页 |
| ·S1AS1和对照用eGFP的沉默结构构建和VIGS处理 | 第29-30页 |
| ·S1AS1对Cf介导的过敏性反应的调控作用 | 第30页 |
| ·AS基因对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae,Xoo)介导的过敏性反应的调控作用 | 第30页 |
| ·S1AS1超表达载体和RNAi表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-38页 |
| ·AS基因在抗病调控中的作用以及S1AS1基因功能初探 | 第31-32页 |
| ·S1AS1转基因结构构建 | 第32-38页 |
| 第三章 水稻天冬酰胺合成酶基因(AS)的克隆及其水稻双元表达载体的构建 | 第38-54页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-43页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·菌种、质粒 | 第38页 |
| ·酶、化学试剂 | 第38-39页 |
| ·抗生素 | 第39页 |
| ·常用试剂的配制 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·OsAS基因的PCR克隆 | 第39-40页 |
| ·OsAS基因的PCR产物割胶回收与纯化 | 第40页 |
| ·OsAS基因纯化后的PCR扩增产物3,端加"A" | 第40页 |
| ·3’端加"A"后的PCR产物的纯化 | 第40页 |
| ·3’端加"A"后的PCR产物与T-vector的连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌DH10b电击感受态的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| ·DNA序列测定及分析 | 第42页 |
| ·OsAS基因双元表达载体结构的设计构建和鉴定 | 第42-43页 |
| ·植物双元表达载体导入根癌农杆菌EHAl05 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·OsAS基因超表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·OsAS基因的克隆及序列测定 | 第43页 |
| ·OsAS融合基因超表达结构的构建 | 第43-44页 |
| ·OsAS基因的RNAi表达结构的构建 | 第44页 |
| ·OsAS基因的部分序列获得及序列测定 | 第44页 |
| ·OsAS基因RNAi表达载体的构建 | 第44页 |
| ·根癌农杆菌的转化与鉴定 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-54页 |
| ·启动子的选择 | 第44-45页 |
| ·关于融合筛选标记基因(HA+Tag) | 第45页 |
| ·关于水稻的RNAi载体pANDA | 第45-54页 |
| 第四章 天冬酰胺合成酶基因的水稻转化及转基因植株的获得 | 第54-68页 |
| ·前言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·转化的受体植物 | 第54页 |
| ·菌株与质粒 | 第54-55页 |
| ·培养基和抗生素 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第55-56页 |
| ·水稻愈伤组织的感染 | 第56页 |
| ·潮霉素抗性植株的再生 | 第56-57页 |
| ·转基因水稻的初步鉴定 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-58页 |
| ·OsAS基因的水稻转化及潮霉素抗性植株(超表达和RNAi)的获得 | 第57-58页 |
| ·OsAS基因的超表达株系和RNAi株系的生长发育区别 | 第58页 |
| ·转OsAS基因水稻的潮霉素初步鉴定 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-68页 |
| ·影响转化效率的主要因素 | 第58-59页 |
| ·转不同OsAS基因的水稻组培苗超表达植株和RNAi植株生长状态 | 第59-68页 |
| 全文小结及后续研究 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附带研究 | 第74-75页 |
| 附录A:本论文所用缩写词及中文对照 | 第75-76页 |
| 附录B:主要化学试剂及缓冲液的配制 | 第76-77页 |
| 附录C:常用培养基配方 | 第77-81页 |
| 附录D:常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第81页 |
