缩写词表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
前言 | 第11-17页 |
材料与方法 | 第17-30页 |
一、试剂和材料 | 第17-20页 |
二、菌株、细胞株和质粒 | 第20-21页 |
三、主要实验方法 | 第21-30页 |
1. 限制性内切酶的酶切反应 | 第21页 |
2. 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第21页 |
3. PCR产物纯化 | 第21-22页 |
4. DNA片段的连接 | 第22页 |
5. 质粒DNA的转化 | 第22页 |
6. 质粒DNA的碱裂解法小量制备 | 第22-23页 |
7. 质粒DNA的大量制备 | 第23页 |
8. HEK-293T细胞培养 | 第23页 |
9. P19细胞培养 | 第23页 |
10. 细胞计数 | 第23-24页 |
11. 细胞复苏 | 第24页 |
12. 细胞传代 | 第24页 |
13. 细胞冻存 | 第24页 |
14. 质粒转染细胞 | 第24页 |
15. 包装慢病毒并感染目标细胞 | 第24页 |
16. 细胞总RNA的制备 | 第24-25页 |
17. 逆转录反应 | 第25页 |
18. PCR扩增 | 第25页 |
19. 退火反应 | 第25页 |
20. 琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
21. Real-time PCR | 第25-26页 |
22. 免疫印迹分析(immunobloting assays,IB) | 第26-28页 |
23. 酸抽提组蛋白 | 第28页 |
24. 免疫荧光 | 第28页 |
25. 基于pLKO.1载体的shRNA质粒构建 | 第28-30页 |
实验结果 | 第30-45页 |
一、RA诱导P19细胞神经分化 | 第30-31页 |
二、Carml在P19细胞神经分化过程中的表达 | 第31-32页 |
三、稳定敲低Carml的P19细胞系的建立 | 第32-37页 |
四、Carml敲低对P19细胞中神经分化潜能的影响 | 第37-39页 |
五、多能性基因在Carml敲低细胞系中的表达 | 第39-41页 |
六、敲低Carml对多能转录调控因子Sox2蛋白及其R113甲基化的影响 | 第41页 |
七、敲低Carml对组蛋白H3甲基化修饰的影响 | 第41-42页 |
八、Carml在其稳定敲低的P19细胞系中的转录共激活作用 | 第42-43页 |
九、组蛋白去甲基化酶Kdm3a在P19细胞诱导分化早期的表达 | 第43-45页 |
讨论 | 第45-49页 |
小结 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-54页 |
附录:综述 | 第54-60页 |
参考文献 | 第57-60页 |
个人简历 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |