| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 综述 | 第12-19页 |
| ·凹叶厚朴抗寒相关研究 | 第12页 |
| ·低温胁迫对植物分子机理的影响 | 第12-14页 |
| ·调控基因 | 第13页 |
| ·保护基因 | 第13-14页 |
| ·SSH差减文库构建原理介绍 | 第14-17页 |
| ·差减文库构建流程 | 第14-16页 |
| ·SSH技术的优缺点 | 第16-17页 |
| ·SSH差减文库构建技术与其他技术的对比 | 第17页 |
| ·论文的研究背景 | 第17-18页 |
| ·论文的研究意义 | 第18-19页 |
| 2 凹叶厚朴抗寒基因差减文库的构建及荧光定量pcr的验证 | 第19-35页 |
| ·材料准备 | 第19-21页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·主要仪器耗材 | 第19页 |
| ·试剂盒 | 第19页 |
| ·试验试剂 | 第19-20页 |
| ·主要试剂的配制与处理 | 第20页 |
| ·差减杂交引物序列 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-22页 |
| ·电导率与logistic方程测定凹叶厚朴的半致死温度 | 第21-22页 |
| ·数据处理 | 第22页 |
| ·总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·植物顶芽的处理 | 第22页 |
| ·Trizol法提取凹叶厚朴顶芽总RNA | 第22-23页 |
| ·RNA质量、纯度检测 | 第23页 |
| ·凹叶厚朴顶芽cDNA的合成 | 第23-25页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·dscDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·Rsal酶切 | 第25页 |
| ·cDNA的差减杂交 | 第25-30页 |
| ·低温胁迫凹叶厚朴酶切dscDNA(Testerds cDNA)两端接头的连接 | 第26页 |
| ·分析接头连接效率 | 第26-27页 |
| ·第一次杂交(FirstHybridization) | 第27页 |
| ·第二次杂交(SecondHybridization) | 第27-28页 |
| ·第一次抑制性PCR扩增(primerPCR) | 第28-29页 |
| ·第二次巢式抑制PCR扩增(NestedPCR) | 第29页 |
| ·消减效率检测 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第30页 |
| ·消减文库生成 | 第30-32页 |
| ·载体连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物的电转 | 第31页 |
| ·cDNA文库条带质量检测 | 第31-32页 |
| ·ESTs测序与分析 | 第32-33页 |
| ·ESTs测序 | 第32页 |
| ·ESTs序列的初步处理 | 第32页 |
| ·ESTs序列的分析 | 第32-33页 |
| ·荧光定量PCR | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-52页 |
| ·半致死温度测定结果 | 第35-36页 |
| ·相对电导率 | 第35页 |
| ·Logistic回归模型的建立及低温半致死温度的确定 | 第35-36页 |
| ·cDNA的合成结果 | 第36-38页 |
| ·RNA提取结果 | 第36-37页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第37-38页 |
| ·差减文库的构建结果 | 第38-42页 |
| ·双链cDNA(dscDNA)的酶切 | 第38-39页 |
| ·接头连接效率分析结果 | 第39页 |
| ·消减产物两次PCR结果 | 第39-40页 |
| ·消减效率检测 | 第40页 |
| ·文库质量评价 | 第40-41页 |
| ·EST长度统计 | 第41-42页 |
| ·测序数据的处理结果 | 第42-48页 |
| ·ESTs长度统计及片段拼接 | 第42页 |
| ·三次重复实验NCBI蛋白数据库注释结果 | 第42-43页 |
| ·第二次片段拼接 | 第43页 |
| ·unigene-3在NCBI蛋白数据库注释结果 | 第43-44页 |
| ·GO功能分类 | 第44-47页 |
| ·推定可能在逆境环境中有响应的基因 | 第47-48页 |
| ·荧光定量pcr结果 | 第48-52页 |
| ·RNA提取 | 第48-49页 |
| ·基因开放读码框架 | 第49-50页 |
| ·不同温度处理下的凹叶厚朴基因表达量 | 第50-52页 |
| 4 结论与讨论 | 第52-56页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·文库构建注意事项 | 第52页 |
| ·两种cDNA合成方法的比较 | 第52-53页 |
| ·分离得到的抗寒基因评价 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-56页 |
| ·电导率的测定 | 第54页 |
| ·RNA的提取及cDNA的合成 | 第54页 |
| ·差减文库的构建 | 第54-55页 |
| ·EST序列的统计分析 | 第55页 |
| ·基因的差异表达 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第59-61页 |
| 附表1 基因NCBI蛋白数据库注释结果(共计60个基因) | 第61-65页 |
| 附图1 推定基因的开放读码框序列及基因的结构域图 | 第65-77页 |
| 附表2 GO term | 第77-83页 |
| 附图2 供试植物凹叶厚朴 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
