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猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达与间接ELISA检测方法的建立及初步应用

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-9页
文献综述第9-16页
 第一章 猪圆环病毒2型研究进展第9-16页
   ·猪圆环病毒2型的历史背景第9-10页
   ·病原学第10-11页
   ·流行病学第11页
   ·临床症状和病理变化第11-12页
   ·猪圆环病毒2型的致病机理第12-13页
     ·免疫抑制第12-13页
     ·其他病原对疾病发展的促进和诱导第13页
     ·PCV2感染猪体内靶细胞的变化第13页
   ·猪圆环病毒病的防控措施第13-14页
     ·疫苗免疫接种第14页
     ·防控继发感染第14页
     ·加强饲养管理第14页
   ·检测方法第14-16页
     ·分子生物学检测第14-15页
     ·血清学检测方法第15-16页
试验研究第16-35页
 第二章 猪圆环病毒2型ORF3的原核表达与纯化第16-28页
   ·材料第16-18页
     ·病毒毒株第16页
     ·载体和菌株第16页
     ·酶和主要试剂第16-17页
     ·主要仪器设备第17页
     ·试剂配制第17-18页
   ·方法第18-23页
     ·引物设计第18页
     ·病毒基因组的提取第18页
     ·PCR扩增第18-19页
     ·DNA片段的回收第19页
     ·PCR产物和质粒的双酶切第19页
     ·重组质粒的构建第19-21页
     ·重组质粒的诱导表达和SDS-PAGE电泳鉴定第21-22页
     ·蛋白纯化第22页
     ·免疫印迹鉴定第22-23页
   ·结果第23-26页
     ·目的基因的扩增第23页
     ·重组质粒的双酶切鉴第23-24页
     ·重组质粒测序鉴定第24页
     ·重组质粒的表达第24-25页
     ·GST-ORF3蛋白纯化的SDS-PAGE检测第25页
     ·纯化蛋白的Western blot分析结果第25-26页
     ·纯化蛋白浓度的测定第26页
   ·讨论第26-27页
   ·小结第27-28页
 第三章 猪圆环病毒2型抗体间接ELISA方法的建立与应用第28-35页
   ·材料第28-29页
     ·主要试剂第28页
     ·主要仪器与设备第28页
     ·ELISA主要试剂与溶液第28-29页
   ·方法第29-30页
     ·间接ELISA检测方法的建立第29-30页
     ·临床血清样品检测第30页
   ·结果第30-33页
     ·重组蛋白抗原最佳包被浓度和血清稀释度的确定第30页
     ·封闭液的选择第30页
     ·血清最佳反应时间的确定第30-31页
     ·显色时间的确定第31页
     ·间接ELISA阴阳性临界值的确定第31-32页
     ·特异性试验结果第32页
     ·重复性试验结果第32-33页
     ·临床血清样品检测结果第33页
   ·讨论第33-34页
   ·小结第34-35页
结论第35-36页
参考文献第36-40页
致谢第40-42页
作者简介第42页

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