| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 前言 | 第16-23页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第一部分 H. pylori hpsh0459基因克隆表达及多克隆抗体制备 | 第23-54页 |
| （二） 材料和方法 | 第23-37页 |
| 1 材料 | 第23-29页 |
| ·实验菌株和载体 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要溶液的配制 | 第25-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-37页 |
| ·H. pylori的培养与鉴定 | 第29页 |
| ·H. pylori DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·H. pylori hpsh0459基因的引物设计与PCR反应 | 第30页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第30-31页 |
| ·感受态细菌细胞DH5α 的制备 | 第31页 |
| ·hpsh0459基因的T-A连接反应 | 第31页 |
| ·连接产物转化DH5α 感受态细菌及转化子的验证 | 第31-32页 |
| ·hpsh0459重组质粒的提取 | 第32页 |
| ·hpsh0459基因推导编码产物的获得 | 第32页 |
| ·H. pylori Hpsh0459蛋白的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·hpsh0459重组原核表达质粒的构建和鉴定 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组Hpsh0459蛋白的大量表达和纯化 | 第35页 |
| ·纯化重组Hpsh0459蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第35-36页 |
| ·重组Hpsh0459蛋白的多克隆抗体制备及其效价测定 | 第36-37页 |
| （三） 结果 | 第37-49页 |
| 1 H. pylori hpsh0459基因片段的克隆及生物信息学分析 | 第37-45页 |
| ·H. pylori WH-21菌株的分离培养与鉴定鉴定 | 第37-38页 |
| ·H. pylori hpsh0459基因片段的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·hpsh0459基因的克隆与鉴定 | 第39页 |
| ·Hpsh0459的基本性质分析 | 第39-41页 |
| ·Hpsh0459蛋白信号肽和跨膜区的预测 | 第41-42页 |
| ·Hpsh0459蛋白二级结构预测 | 第42-43页 |
| ·Hpsh0459卷曲螺旋的预测分析 | 第43-44页 |
| ·Hpsh0459蛋白三维结构的预测 | 第44页 |
| ·Hpsh0459蛋白功能结构域的预测 | 第44-45页 |
| 2 H. pylori hpsh0459基因的原核表达及抗体制备 | 第45-49页 |
| ·hpsh0459(1233bp)及hpsh0459(633bp)基因片段PCR扩增克隆及鉴定序列分析 | 第45-47页 |
| ·重组表达质粒pET28a-hpsh0459的构建及序列分析 | 第47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的纯化与抗体效价测定 | 第48-49页 |
| （四） 讨论 | 第49-50页 |
| （五） 结论 | 第50-51页 |
| （六） 参考文献 | 第51-54页 |
| 第二部分H. pylori Hpsh0459蛋白的亚细胞定位及其互作蛋白和细胞毒性分析 | 第54-67页 |
| （二） 材料和方法 | 第54-59页 |
| 1 材料 | 第54-56页 |
| ·菌株及细胞株 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·主要溶液配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-59页 |
| ·H. pylori分离组分和亚细胞定位 | 第56-57页 |
| ·Hpsh0459蛋白的互作蛋白分析 | 第57页 |
| ·免疫共沉淀中Hpsh0459蛋白的验证 | 第57-58页 |
| ·细胞的复苏与培养 | 第58页 |
| ·Hpsh0459蛋白与GES-1 细胞共培养及MTT实验 | 第58页 |
| ·Hpsh0459蛋白与GES-1 细胞共培养上清液IL-8 浓度分析 | 第58页 |
| ·统计学分析 | 第58-59页 |
| （三）结果 | 第59-62页 |
| 1 Hpsh0459蛋白的亚细胞定位及互作蛋白分析 | 第59-60页 |
| ·Hpsh0459蛋白的亚细胞定位 | 第59页 |
| ·Hpsh0459蛋白的互作蛋白分析 | 第59-60页 |
| 2 Hpsh0459蛋白的细胞毒性分析 | 第60-62页 |
| ·Hpsh0459蛋白与GES-1 细胞共培养及MTT分析 | 第60-61页 |
| ·Hpsh0459蛋白与GES-1 细胞共培养上清液IL-8 浓度分析 | 第61-62页 |
| （四）讨论 | 第62-63页 |
| （五）结论 | 第63-64页 |
| （六）参考文献 | 第64-67页 |
| 第三部分H. pylori hpsh0459基因敲除质粒的构建 | 第67-73页 |
| （二）材料和方法 | 第67-69页 |
| 1 材料 | 第67页 |
| ·菌株与载体 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-69页 |
| ·hpsh0459基因上下游同源臂的扩增 | 第67-68页 |
| ·重组自杀质粒的构建和鉴定 | 第68-69页 |
| （三）结果 | 第69-70页 |
| ·hpsh0459基因上下游同源臂的PCR扩增 | 第69-70页 |
| ·hpsh0459基因缺陷重组自杀质粒的构建 | 第70页 |
| 讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 综述 | 第73-81页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
