| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-33页 |
| 第一节 基因无痕敲除研究概述 | 第12-21页 |
| ·基因重组基本概念与分类 | 第12-13页 |
| ·微生物同源重组系统——RecA系统 | 第13-14页 |
| ·反向筛选标记 | 第14-16页 |
| ·常用的基因无痕敲除系统 | 第16-21页 |
| 第二节 基因组精简概述 | 第21-24页 |
| ·合成生物学概念 | 第21-22页 |
| ·基因组精简 | 第22-24页 |
| ·最小基因组 | 第24页 |
| 第三节 本研究的意义与主要内容 | 第24-33页 |
| ·本研究的意义 | 第25-29页 |
| ·本研究的主要内容 | 第29-33页 |
| 第二章 门多萨假单胞菌NK-01基因无痕敲除体系的建立 | 第33-50页 |
| 第一节 实验材料与设备 | 第33-36页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第33-34页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·培养基与相关试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器与设备 | 第35-36页 |
| ·工具酶以及相关基因操作产品 | 第36页 |
| ·其他化学药品 | 第36页 |
| 第二节 实验操作与方法 | 第36-45页 |
| ·野生型P. mendocina NK-01对于5-FU敏感性测试 | 第36-37页 |
| ·P. mendocina NK-01基因组的提取 | 第37页 |
| ·DNA片段的验证与纯化 | 第37页 |
| ·大肠杆菌DH5α/S17-1感受态的制备 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第38页 |
| ·质粒的提取 | 第38页 |
| ·二亲结合 | 第38-39页 |
| ·upp突变基因的T载体克隆构建 | 第39-41页 |
| ·upp基因打靶载体pEx18Tc-Δupp的构建 | 第41-43页 |
| ·upp基因缺失突变菌株的构建 | 第43-45页 |
| 第三节 实验结果与分析 | 第45-50页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01与upp基因缺失菌株对5-FU抗性的验证 | 第45-46页 |
| ·upp突变基因T载体构建 | 第46页 |
| ·打靶载体pEx18Tc-Δupp的构建 | 第46-47页 |
| ·upp基因缺失突变菌株的构建 | 第47-49页 |
| ·小结与讨论 | 第49-50页 |
| 第三章 门多萨假单胞菌NK-01无痕敲除体系的应用 | 第50-71页 |
| 第一节 实验材料与设备 | 第50-55页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第50-52页 |
| ·引物设计 | 第52-54页 |
| ·培养基与相关试剂 | 第54页 |
| ·实验仪器与设备 | 第54页 |
| ·工具酶及相关基因操作产品 | 第54-55页 |
| 第二节 实验操作与方法 | 第55-62页 |
| ·打靶载体pEx18Tc-upp的构建 | 第55-57页 |
| ·利用反向筛选标记upp结合自杀质粒进行基因敲除(以algA基因敲除为例) | 第57-60页 |
| ·algA基因回补菌株P.mendocina NK-01 Δupp-algA的构建 | 第60-62页 |
| 第三节 实验结果与分析 | 第62-71页 |
| ·打靶载体pEx18Tc-upp的构建 | 第62-63页 |
| ·algA基因缺失突变菌株的构建 | 第63-66页 |
| ·algA基因回补菌株P mendocina NK-01 Δupp-algA的构建 | 第66-67页 |
| ·大片段基因缺失突变菌株的构建 | 第67-70页 |
| ·小结与讨论 | 第70-71页 |
| 第四章 门多萨假单胞菌NK-01突变菌株发酵性能的研究 | 第71-92页 |
| 第一节 实验材料与设备 | 第71-74页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第71-72页 |
| ·引物设计 | 第72页 |
| ·培养基与相关试剂 | 第72-73页 |
| ·实验仪器与设备 | 第73页 |
| ·工具酶及相关基因操作产品 | 第73页 |
| ·其他化学药品 | 第73-74页 |
| 第二节 实验操作与方法 | 第74-79页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种生长曲线的测定 | 第74页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种生长代时的测定 | 第74页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种摇瓶发酵实验 | 第74页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种分批发酵实验 | 第74-75页 |
| ·发酵产物PHA与褐藻寡糖的提取方法 | 第75-76页 |
| ·褐藻寡糖的定量实验 | 第76页 |
| ·PHA性质的检测 | 第76-77页 |
| ·突变菌株PHA相关基因转录分析 | 第77-79页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第79-92页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种生长曲线 | 第79-80页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种生长代时 | 第80页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种摇瓶发酵实验 | 第80-82页 |
| ·野生型P.mendocina NK-01及其突变菌种分批发酵实验结果 | 第82-83页 |
| ·PHA性质的检测结果 | 第83-90页 |
| ·突变菌株PHA相关基因转录分析结果 | 第90-91页 |
| ·本章小结与讨论 | 第91-92页 |
| 第五章 总结与展望 | 第92-95页 |
| 第一节 总结 | 第92页 |
| 第二节 展望 | 第92-95页 |
| ·无痕敲除体系优化 | 第92-93页 |
| ·基因精简菌株的优化 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第103页 |
