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Itk信号转导通路在A型流感病毒与T细胞相互作用中的功能研究

缩略词表第1-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-13页
第一章 文献综述第13-23页
 1 流感病毒免疫防御研究进展第13-18页
   ·流感病毒概述第13-14页
   ·流感病毒感染过程中的免疫防御机制第14-18页
     ·流感病毒感染的天然免疫防御第15-16页
     ·流感病毒感染的获得性免疫防御第16-18页
 2 Itk 信号转导通路研究进展第18-21页
   ·Itk 信号转导通路第18-20页
     ·Itk 分子的基本结构第19页
     ·Itk 活化 TCR 下游信号第19-20页
   ·Itk 信号转导通路对 T 细胞功能的影响第20-21页
 3 研究目的和意义第21-23页
第二章 实验研究第23-82页
 引言第23-24页
 1 材料与方法第24-45页
   ·材料第24-27页
     ·菌株、细胞株及病毒株第24页
     ·实验动物和鸡胚第24页
     ·质粒第24-25页
     ·引物序列及 shRNA 干扰序列第25-26页
     ·实验主要试剂第26-27页
     ·主要实验仪器第27页
   ·实验方法第27-45页
     ·重组流感病毒的增殖培养及毒力测定[108]第27-29页
     ·流感病毒感染 BALB/c 小鼠病理组织切片的制备第29页
     ·淋巴细胞分离实验第29-30页
     ·细胞凋亡分析第30-31页
     ·流式细胞分析及细胞分选第31页
     ·细胞培养及转染第31-33页
     ·质粒构建第33-37页
     ·定点突变第37-38页
     ·Itk 基因沉默细胞系的构建[110]第38-40页
     ·流感病毒感染细胞实验第40页
     ·Real-time PCR第40-42页
     ·质膜分离实验[110]第42-43页
     ·蛋白免疫印迹(Western blot)第43-44页
     ·免疫荧光实验(Confocal)第44-45页
 2 结果与分析第45-79页
   ·甲型流感病毒 A/WSN/33(H1N1)的培养及毒力的测定第45-47页
     ·甲型流感病毒 A/WSN/33(H1N1)的扩增及血凝价的测定第45页
     ·甲型流感病毒感染 MDCK 细胞的空斑测定第45-46页
     ·甲型流感病毒 A/WSN/33(H5N1)对 BALB/C 小鼠毒力的测定第46-47页
   ·甲型流感病毒感染 BALB/c 小鼠后,导致小鼠脾脏和胸腺组织结构的破坏第47-53页
     ·甲型流感病毒感染 BALB/c 小鼠的临床表现和大体病变第47-50页
     ·甲型流感病毒感染 BALB/c 小鼠脾脏和胸腺的病理组织学变化第50-53页
   ·甲型流感病毒感染 BALB/c 小鼠后,实验发现小鼠体内有一群 T 淋巴细胞对甲型流感病毒具有易感性第53-63页
     ·Western blot 及细胞免疫荧光检测病毒感染小鼠淋巴细胞内的流感病毒第53-55页
     ·细胞免疫荧光检测病毒感染小鼠 CD3+ T 淋巴细胞内的流感病毒第55-57页
     ·细胞免疫荧光检测病毒感染小鼠 CD3+ T 淋巴细胞表面的流感病毒α-2,6唾液酸受体第57-58页
     ·流感病毒感染淋巴细胞的凋亡分析第58-60页
     ·流式细胞术检测病毒感染小鼠 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞中的流感病毒第60-63页
   ·通过体外实验发现,甲型流感病毒能够感染原代 T 细胞和 Jurkat T 细胞第63-69页
     ·Western blot 及细胞免疫荧光检测小鼠原代 CD3+ T 细胞内的流感病毒.第63-65页
     ·流式细胞术检测小鼠原代 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞中的流感病毒第65-67页
     ·甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞中流感病毒的检测第67-69页
   ·甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞能够影响 Itk 在细胞内的表达和定位第69-72页
     ·Real-time PCR 检测甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞中 Itk 的表达情况第69-70页
     ·细胞免疫荧光及 Western blot 检测甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞中 Itk 的定位情况第70-72页
   ·在甲型流感病毒感染的 Jurkat T 细胞中,PLC-γ1 磷酸化水平的上调是 Itk 依赖性的第72-75页
     ·甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞中,PLC-γ1 磷酸化水平上调第72页
     ·Itk 干扰细胞系的构建第72-74页
     ·Itk 分子的缺失对甲型流感病毒感染 Jurkat T 细胞中,PLC-γ1 磷酸化的影响第74-75页
   ·在 JurkatT 细胞中干扰 Itk,将抑制流感病毒在细胞中的复制第75-79页
     ·在 JurkatT 细胞中干扰 Itk 对流感病毒复制的影响第75-77页
     ·干扰 Itk 影响流感病毒复制的验证实验第77-79页
 3 总结与讨论第79-82页
参考文献第82-94页
附录第94-97页
致谢第97-98页
博士期间发表的论文第98页

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