| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 第一章 预实验 | 第8-14页 |
| ·检测胆管癌细胞内源基因的表达 | 第8-11页 |
| ·实验材料 | 第8页 |
| ·实验方法 | 第8-11页 |
| ·总蛋白抽提 | 第8-9页 |
| ·上样样品准备 | 第9页 |
| ·SDS-PAGE | 第9-10页 |
| ·免疫印迹 | 第10页 |
| ·免疫显色 | 第10-11页 |
| ·结果 | 第11页 |
| ·结论 | 第11页 |
| ·考察plvt7慢病毒感染RBE细胞后的感染效率,筛选感染效率能够达到80%以上 | 第11-14页 |
| ·实验材料 | 第11-12页 |
| ·实验操作 | 第12-13页 |
| ·细胞铺板 | 第12页 |
| ·感染慢病毒 | 第12-13页 |
| ·结果 | 第13-14页 |
| ·结论 | 第14页 |
| 第二章 Smad4基因干扰载体的构建、慢病毒包装及靶点验证 | 第14-29页 |
| ·实验试剂与材料 | 第14-17页 |
| ·实验方法 | 第17-26页 |
| ·smad4干扰载体的构建 | 第17-21页 |
| ·shRNA的设计和引物合成 | 第18页 |
| ·引物退火 | 第18页 |
| ·pMagic7.1载体酶切回收 | 第18-19页 |
| ·干扰片段连接入载体 | 第19页 |
| ·转化 | 第19页 |
| ·阳性克隆测序 | 第19-20页 |
| ·质粒的小量抽提 | 第20-21页 |
| ·靶点验证 | 第21-23页 |
| ·感染 | 第21页 |
| ·Smad4干扰效果的检测(qPCR方法） | 第21-23页 |
| ·慢病毒的包装、浓缩和滴度测定 | 第23-26页 |
| ·慢病毒的包装 | 第23-24页 |
| ·慢病毒的浓缩与纯化 | 第24页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第24-26页 |
| ·实验结果 | 第26-28页 |
| ·结论 | 第28-29页 |
| 第三章 下调Smad4基因及调节TGF β1对胆管癌细胞EMT相关因子的影响 | 第29-35页 |
| ·实验试剂与材料 | 第29-30页 |
| ·实验试剂 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30页 |
| ·分组处理 | 第30页 |
| ·目的基因的检测 | 第30页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第30页 |
| ·统计学方法 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-34页 |
| ·实验结论 | 第34-35页 |
| 第四章 讨论 | 第35-37页 |
| 第五章 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 文献综述 | 第40-51页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
