| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| ·鲤春病毒血症病毒研究进展 | 第10-13页 |
| ·SVC流行特点 | 第10-11页 |
| ·SVCV生物学特性 | 第11页 |
| ·SVCV基因组结构 | 第11-12页 |
| ·SVCV的结构蛋白 | 第12-13页 |
| ·核蛋白 | 第12页 |
| ·基质蛋白 | 第12页 |
| ·糖蛋白 | 第12页 |
| ·磷蛋白 | 第12-13页 |
| ·病毒依赖性RNA聚合酶蛋白 | 第13页 |
| ·细胞自噬研究概论 | 第13-19页 |
| ·细胞自噬的种类及过程 | 第13-14页 |
| ·细胞自噬的分子机理 | 第14-15页 |
| ·细胞自噬的信号通路调节 | 第15页 |
| ·细胞自噬的常用研究方法 | 第15-17页 |
| ·扫描透射电镜观察 | 第15-16页 |
| ·免疫荧光技术 | 第16页 |
| ·Western blot检测细胞自噬标记蛋白LC3的表型变化 | 第16-17页 |
| ·长寿蛋白的降解 | 第17页 |
| ·p62的降解 | 第17页 |
| ·细胞自噬与病毒感染的研究进展 | 第17-18页 |
| ·细胞自噬与机体免疫研究进展 | 第18-19页 |
| ·蛋白质组学方法及研究现状 | 第19-20页 |
| 2 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 3 SVCV诱导细胞自噬的发生和分子机理 | 第21-50页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·细胞、毒株 | 第21页 |
| ·载体与质粒 | 第21页 |
| ·引物序列及siRNA | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第22-23页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第23页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·表达质粒的构建 | 第23-24页 |
| ·Western blot实验 | 第24-25页 |
| ·样品制备 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·Western Blot检测分析 | 第25页 |
| ·siRNA及质粒转染 | 第25-26页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第26页 |
| ·激光共聚焦显微镜观测 | 第26页 |
| ·MTT法检测细胞活性 | 第26页 |
| ·透射电镜观察 | 第26-27页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第27-28页 |
| ·细胞培养与病毒滴度测定 | 第28页 |
| ·紫外灭活病毒的制备 | 第28页 |
| ·统计学方法 | 第28页 |
| ·实验结果 | 第28-46页 |
| ·SVCV感染EPC细胞诱导细胞自噬 | 第28-33页 |
| ·EGFP-LC3融合表达质粒的构建 | 第28-30页 |
| ·扫描透射电镜观察SVCV感染细胞后形成自噬泡结构 | 第30页 |
| ·SVCV感染EPC细胞有自噬小体的点状聚集 | 第30-31页 |
| ·SVCV感染EPC细胞后LC3的表达变化 | 第31-33页 |
| ·细胞自噬促进SVCV的增殖 | 第33-39页 |
| ·自噬抑制剂和自噬诱导剂对细胞毒性的影响 | 第33-34页 |
| ·细胞自噬对SVCV mRNA复制的影响 | 第34-35页 |
| ·细胞自噬对SVCV粒子释放的影响 | 第35-36页 |
| ·干扰LC3和Beclin-1基因表达抑制SVCV复制和释放 | 第36-37页 |
| ·细胞自噬对SVCV入侵的作用 | 第37-39页 |
| ·SVCV诱导EPC细胞自噬机理的探讨 | 第39-44页 |
| ·SVCV入侵可以诱导细胞自噬 | 第39-40页 |
| ·SVCV/G可以诱导细胞自噬 | 第40-41页 |
| ·mTOR蛋白在SVCV诱导细胞自噬中的作用 | 第41-42页 |
| ·ERK蛋白在SVCV诱导细胞自噬中的作用 | 第42-43页 |
| ·SVCV通过激活ERK蛋白抑制mTOR蛋白诱导细胞自噬 | 第43-44页 |
| ·细胞自噬促进病毒复制机理的初步探讨 | 第44-46页 |
| ·细胞自噬通过延长被感染细胞的存活时间促进病毒复制 | 第44-45页 |
| ·细胞自噬可以清除细胞内受损的线粒体 | 第45-46页 |
| ·讨论与结论 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·SVCV感染宿主细胞产生完全细胞自噬 | 第47-48页 |
| ·细胞自噬促进SVCV的增殖 | 第48页 |
| ·mTOR-RK途径参与SVCV诱导细胞自噬进程 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 4 SVCV感染宿主细胞的蛋白质组学分析 | 第50-66页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·细胞、毒株 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50-51页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-56页 |
| ·细胞总蛋白质的制备 | 第51页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第51-53页 |
| ·第一向固相pH梯度等电聚焦 | 第51-52页 |
| ·第二向SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳 | 第52页 |
| ·凝胶染色 | 第52页 |
| ·双向凝胶电泳图像扫描及图像分析 | 第52-53页 |
| ·制备质谱样品 | 第53-54页 |
| ·MALDI-TOF-MS质谱分析及质谱数据的数据库搜寻 | 第54-55页 |
| ·差异蛋白质的生物信息学分析 | 第55页 |
| ·Western blot分析 | 第55页 |
| ·实时荧光定量分析 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-60页 |
| ·双向电泳和质谱鉴定的差异蛋白分析 | 第56-57页 |
| ·实时荧光定量PCR验证SVCV感染的差异性蛋白 | 第57-58页 |
| ·Western blot验证SVCV感染的差异性蛋白 | 第58-60页 |
| ·讨论与结论 | 第60-66页 |
| ·SVCV感染导致细胞骨架相关蛋白的改变 | 第61页 |
| ·SVCV感染导致泛素蛋白酶体途径(UPP)相关蛋白的改变 | 第61-62页 |
| ·SVCV感染导致信号通路相关蛋白的改变 | 第62页 |
| ·SVCV感染导致生物代谢相关蛋白的改变 | 第62-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
