| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 英文缩写表 | 第13-15页 |
| 插图和附表清单 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| ·结核病的研究进展 | 第17-20页 |
| ·结核病的发生 | 第17-18页 |
| ·结核病的传播和蔓延 | 第18-19页 |
| ·结核病的预防和控制 | 第19-20页 |
| ·分枝杆菌的病原学研究 | 第20-22页 |
| ·分枝杆菌的生物学性状 | 第20-21页 |
| ·分枝杆菌细胞壁结构和基因组学 | 第21-22页 |
| ·分枝杆菌感染巨噬细胞的生物学过程 | 第22-25页 |
| ·分枝杆菌进入巨噬细胞 | 第22页 |
| ·巨噬细胞吞噬分枝杆菌后引发的细胞免疫反应 | 第22-23页 |
| ·巨噬细胞发生自噬 | 第23-24页 |
| ·肉芽肿形成 | 第24-25页 |
| ·动物防御素 | 第25-30页 |
| ·防御素的分类和结构特点 | 第25-27页 |
| ·防御素在宿主免疫防御中的功能 | 第27-28页 |
| ·防御素在结核分枝杆菌感染中的作用 | 第28-30页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第30-32页 |
| ·宿主菌毕赤酵母 | 第30-31页 |
| ·表达载体的选择 | 第31-32页 |
| ·本研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 牛中性粒细胞β-防御素成熟肽4和5毕赤酵母表达质粒的构建 | 第33-49页 |
| 引言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·宿主菌株和载体 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第34-35页 |
| ·主要仪器及设备 | 第35页 |
| ·主要分析软件 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·牛肺脏组织总RNA的提取 | 第36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·BNBD4成熟肽(mBNBD4)和BNBD5成熟肽(mBNBD5)的基因克隆 | 第36-38页 |
| ·真核表达载体pPIC9K的鉴定 | 第38-39页 |
| ·mBNBD4和mBNBD5真核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·实验结果 | 第41-46页 |
| ·mBNBD4和mBNBD5目的基因的PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·mBNBD4和mBNBD5目的基因的双酶切结果 | 第42页 |
| ·真核表达载体pPIC9K的双酶切结果 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的DNA测序结果 | 第44-45页 |
| ·真核重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·小结与讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 重组牛中性粒细胞β-防御素4和5成熟肽蛋白在毕赤酵母菌株GS115中的诱导表达 | 第49-70页 |
| 引言 | 第49页 |
| ·材料 | 第49-55页 |
| ·宿主菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第50-54页 |
| ·主要仪器及设备 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-62页 |
| ·毕赤酵母菌株GS115的纯化 | 第55页 |
| ·重组质粒无内毒素质粒DNA大量提取 | 第55-56页 |
| ·无内毒素质粒DNA的线性化及纯化回收 | 第56-57页 |
| ·GS115毕赤酵母电转化 | 第57-58页 |
| ·毕赤酵母阳性转化子的筛选 | 第58-59页 |
| ·毕赤酵母阳性转化子的PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第61-62页 |
| ·实验结果 | 第62-68页 |
| ·重组质粒的线性化结果 | 第62-63页 |
| ·毕赤酵母阳性转化子的筛选 | 第63-64页 |
| ·毕赤酵母His~+Mut~+高拷贝转化子的PCR鉴定 | 第64-65页 |
| ·毕赤酵母菌株GS115转化结果 | 第65-66页 |
| ·重组蛋白的诱导表达结果 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白的纯化及Tricine-SDS-PAGE分析结果 | 第67-68页 |
| ·重组蛋白的Western Blot鉴定结果 | 第68页 |
| ·小结与讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 重组蛋白mBNBD4和mBNBD5的直接抗分枝杆菌活性 | 第70-81页 |
| 引言 | 第70页 |
| ·材料 | 第70-73页 |
| ·菌株 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70-71页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第71-72页 |
| ·主要仪器及设备 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5的抑菌活性研究 | 第73页 |
| ·重组蛋白的抗耻垢分枝杆菌活性研究 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白的抗牛分枝杆菌活性研究 | 第74页 |
| ·重组蛋白mBNBD4与牛分枝杆菌共培养后细菌形态的变化 | 第74页 |
| ·重组蛋白mBNBD5与牛分枝杆菌共培养后细菌形态的变化 | 第74-75页 |
| ·统计学分析 | 第75页 |
| ·实验结果 | 第75-79页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5具有抑菌生物活性 | 第75页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5具有抗耻垢分枝杆菌活性 | 第75-76页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5具有抗牛分枝杆菌活性 | 第76-78页 |
| ·扫描电镜观察重组蛋白mBNBD4对牛分枝杆菌形态的影响 | 第78页 |
| ·扫描电镜观察重组蛋白mBNBD5对牛分枝杆菌形态的影响 | 第78-79页 |
| ·小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 重组蛋白mBNBD4和mBNBD5对分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响 | 第81-91页 |
| 引言 | 第81页 |
| ·材料 | 第81-85页 |
| ·细胞 | 第81页 |
| ·菌株 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81-82页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第82-84页 |
| ·主要仪器及设备 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-87页 |
| ·小鼠巨噬细胞系Raw264.7的培养 | 第85页 |
| ·CCK-8检测重组蛋白对巨噬细胞活性的影响 | 第85页 |
| ·重组蛋白对耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响 | 第85-86页 |
| ·重组蛋白对牛分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响 | 第86页 |
| ·重组蛋白对结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响 | 第86-87页 |
| ·统计学分析 | 第87页 |
| ·实验结果 | 第87-90页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5对巨噬细胞活性的影响 | 第87-88页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5降低了耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内的存活 | 第88-89页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5降低了牛分枝杆菌在巨噬细胞内的存活 | 第89页 |
| ·重组蛋白mBNBD4和mBNBD5降低了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的存活 | 第89-90页 |
| ·小结与讨论 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91-93页 |
| 创新 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 个人简介 | 第107-108页 |
